Macrofago Practicas

EL MACRÓFAGO COMO SISTEMA INMUNOLÓGICO : EVALUACION DE LA PRODUCCION DE OXIDO NITRICO

I. INTRODUCCIÓN
Dentro de la Medicina y demás ciencias biomédicas, una célula es considerada como un sistemabiológico que permite al investigador hacer estudios sobre respuesta de una célula frente a un determinado compuesto, también es utilizado para poder expresar genes foráneos, es decir utilizarlos comoverdaderas fabricas biológicas en beneficio del hombre.
Una de las células de mamíferos más utilizadas como sistema biológico para hacer investigación en el campo de la Inmunología, son losmacrófagos.
Los macrófagos son glóbulos blancos de la sangre que son especializados en la digestión de partículas y son distribuidos indistintamente en la sangre y tejidos y participan en la defensa, tanto enla respuesta inmune adaptativa, como en la respuesta inmune innata, a través de la ingestión de patógenos, estas células también participan en el importante rol de limpieza de células dañadas omuertas.
II. OBJETIVOS.
- Obtener macrófagos activados a través de la infección de ratas con lisado de bacterias.
- Extraer, Aislar y Cultivar macrófagos.
- Cuantificar la producción de Oxido Nitrico(NO)

III. MATERIALES Y REACTIVOS.
- Ratas adultas.
- Cultivo de bacterias (E.coli).
- Jeringas hipodérmicas
- Pipetas pasteur
- Pipetas de 1,2 y 5 ml
- NaCI 0.9 % y NaCI 1.8 %.
-Sulfanilamida
- Naftilendiamina
- Medio de Cultivo RPMI 1640

IV. PROCEDIMIENTO
A) Preparación de lisado de bacterias:

1. Con la ayuda de una asa de colé cosechar las bacterias crecidas en una placa deagar nutritivo y resuspenderlas en un tubo de ensayo que contiene 1ml de NaCI al 0.9%.
2. Calentar la suspensión de células bacterianas hasta ebullición, durante tres veces, agitando cuidadosamente eltubo para evitar que el contenido se proyecte.

B) Infección de ratas con lisado de bacterias.
1. Proceder a inyectar intraperitonialmente los ratones con 1.0 ml de lisado bacteriano, utilizando...