Manual de bacter I

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

MANUAL DE LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA I

AUTORES:
M.C. REYNA DEL CONSUELO ALMIRAY PINZÓN
M.C. GLORIA LEÓN TELLO
M.C. ALMA LÓPEZ GARCÍA
M.C. MARÍA SUSANA PERÉZ FERNÁNDEZ
M.C. PATRICIA GUADALUPE SUÁREZ ALBORES
D.C. FAUSTO TEJEDA TRUJILLO
M.S.P. CLAUDY LORENAVILLAGRÁN PADILLA

1

ÍNDICE
NÚMERO DE
PRÁCTICA
Práctica 1

TÍTULO

Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para

PÁGINA

3

la identificación de bacterias
Práctica 2

Caracterización de bacterias no fermentadoras

8

Práctica 3

Caracterización del género Pseudomonas

13

Práctica 4

Caracterización del género Haemophilus

15

Práctica 5

Caracterización del género Brucella

17

Práctica 6Caracterización de bacterias de los géneros
Neisseria y Moraxella

19

Práctica 7

Caracterización de enterobacterias: lactosa
positivas

21

Práctica 8

Caracterización de enterobacterias: lactosa
negativas

25

Práctica 9

Caracterización del género Vibrio

28

Práctica 10

Caracterización de bacterias de los géneros
Streptococcus y Enterococcus

30

Práctica 11

Caracterización de bacteriasdel género
Staphylococcus
Caracterización de bacilos Grampositivos: Bacillus

33

Práctica 12
Bibliografía

36
38

2

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

PRACTICA No.1
APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
Introducción
La identificación de una bacteriaes la asignación a un taxón según una clasificación dada y
consiste en la determinación de las características fenotípicas y/o genotípicas y la comparación de
estas características con los diferentes taxones de la clasificación considerada. Las características
a determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en
la identificación.

Cowan y Steelestablecen un grupo de pruebas, denominadas pruebas primarias, con las
cuales se puede determinar el género, grupo de géneros o en algún caso, familia a la que
pertenece un aislamiento. Dichas pruebas son:

1.- Tinción de Gram.
2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener bacilos Grampositivos (BGP)).
3.- Tinción de Ziehl-Neelsen (sólo en caso de tener bacilos BGP).
4.- Metabolismo(Oxidativo/Fermentativo/Inerte).
5.- Producción de catalasa.
6.- Producción de oxidasa.
7.- Movilidad.
8.- Crecimiento de aerobios.
9.- Crecimiento de anaerobiosis.

3

10.- Producción de ácido a partir de glucosa.

También se pueden incluir pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie.
Estas dependerán del género o familia determinado. (ejem. producción de pigmentos, producción
de indol apartir de triptófano, producción de coagulasa, de fenilalanina desaminasa, etc.)

Objetivo
Realizar tomando como base los criterios establecidos por Cowan y Steel, las pruebas
bioquímicas fundamentales, que permiten la identificación presuntiva de las bacterias de interés
médico.

Material
Equipos de tinción de Gram

Tubos con O/F con glucosa

Sensidiscos de oxidasa

Placas con agar nutritivo osoya tripticasa

Reactivo para catalasa
Portaobjetos
Benzal
Algodón
Cepas de bacilos gramnegativos fermentadores y no fermentadores

Metodología
Tomar una cepa problema a la cual se le realizará lo siguiente:
1. Inocular por estría cruzada una placa de agar nutritivo, incubar a 37°C durante 24 h.
2. De una colonia aislada realizar la tinción de Gram (ver figura 1)


Hacer un frote de las coloniascaracterizadas, tomando con el asa bacteriológica una
pequeña muestra de una colonia aislada y mezclarla con una gota de agua sobre un
portaobjetos. Extender esta suspensión y dejar secar.



Fijar el frote por calor deslizando el portaobjetos sobre la flama del mechero.



Cubrir el frote con cristal violeta y dejarlo actuar por un minuto. Escurrir el colorante
y lavar con chorro suave de agua...