MANUAL DE REACTIVOS

MANUAL DE REACTIVOS 


La identificación de aminoácidos o sólo proteínas se puede llevar a cabo por reacciones cualitativas sencillas como pueden ser la reacción de Ninhidrina, de Biuret, Xantoproteíca y la de los grupos sulfihidrilo.
Ninhidrina
Preparación:
Coloca 2 mL de la solución a analizar (al 2%) en un tubo de ensayo y agrégale 5 gotas de la solución de ninhidrina al 1%solubilizada en etanol. Se calienta en un baño de maría por 1 a 2 minutos.

Fundamento:
La ninhidrina decarboxila y desamina al aminoácido gracias a su fuerte poder oxidante. La ninhidrina reducida formada reaccione con una moléocula de ninhidrin no reducida y con el amoniaco resultante de la desaminación para formar un compuesto complejo que presenta coloración violeta. De esta forma se puedendeterminar cuantitativamente los aminoácidos por espectrofotometría, y también por gasometría, gracias al dióxido de carbono que se forma. La prueba de ninhidrina es positiva para aminoácidos y proteínas que tengan un grupo -NH2 libre. Cuando el grupo -NH2 reacciona con ninhidrina, se forma un complejo azulvioleta.


Aplicaciones: Determinación del grupo amino de aminoácidos y proteínas

Cuidados:Tóxico 1 y corrosivo

Reactivo de Biuret 

Preparación:
Disolver 3,8 g de CuSO4.5H2O y 6,7 g NaEDTA en 700 mL de H2O. Mientras se agita añadir 200 mL de NaOH 5N y luego 1g de KI como estabilizante. Guardar en frasco de plástico, cubierto con papel alumino.

Fundamento:
La prueba Biuret es una prueba general para proteínas, no especifica. Cuando una proteína reacciona con sulfato de cobre(II) (color azul) se forma como respuesta positiva un complejo color violeta. El método de Biuret, se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico. La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustanciasinterfieren. La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero).

Uso:
Para determinación de proteínas(Enlace peptídico)

Cuidados:
Tóxico y corrosivo


Xanthproteica

Procedimiento:
Coloca 2 mL de la solución a analizar (al 2%) en un tubo de ensayo y agrega 1 mL de ácido nítricoconcentrado. Mezclar bien, calentar a baño maría y observar. Adicionar 2 mL de NaOH al 40% lentamente sin agitar y observar.
Fundamento:
En la reacción xanthoproteica, el HNO3 reacciona con el radical fenilo de los aminoácidos que lo contienen, radical que se transforma en hidroxibenceno, que da el color amarillo característico de esta reacción, de ahí su nombre, reacción xantoproteica.

En laprueba Xanthproteica, los anillos fenilo que contengan un grupo activante pueden ser nitrados produciendo un compuesto amarillo:

Uso:
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítricoconcentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores degrupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro.



Reactivo BCA


Preparación: El reactivo de trabajo se prepara mezclandp 100 volúmenes de A con 2 volúmenes de B. Reactivo A: BCA 1%, Na2CO3 2%, tartrato sódico 0,16%, NaOH 0,4% y NaHCO3 0,95%. Ajustar a pH 11,25 con NaOH. Reactivo B: CuSO4 al 4%Fundamento:
El ácido bicinconínico, sal sódica, es un compuesto capaz de formar un complejo púrpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un método analítico capaz de monitorizar el ión cuproso producido en una reacción entre las proteínas con Cu2+ en medio alcalino (reacción de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromóforo proporciona un método para la...