Microbiología Lab 2


Objetivos:
-Diferenciar estructuras o microorganismos con características superficiales distintas mediante la tinción GRAM.
-Aplicar adecuadamente el método de la tinción GRAM.
Discusiones:
Negroni (2009), considera a la tinción Gram como un método rápido y sencillo. Y agrega a sus funciones, que permite observar la forma, tamaño y la agrupación de los microorganismos.
Antes de hacer latinción Gram, primero se fijó la muestra para inmovilizar a las células bacterianas sobre el portaobjetos para que no sean arrastradas en los procesos de teñido y de lavado. En la fijación, es preferible no usar pinzas, ya que el exceso de calor dañaría la estructura de la célula. (Carlos Ganazo, 2005).
Primero el colorante más usado, el cristal violeta. Universidad Tecnológica Nacional de Argentina(2009) afirma que el colorante cristal violeta es un colorante catiónico lo que significa que tiene alta afinidad con compuestos de carga negativa como son los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos, por lo general la envoltura externa de los microorganismos está cargada negativamente y es por eso que se usa este colorante como colorante primario, ya que tiñe todas las células por igual y luegodependiendo de la composición de su envoltura y su capacidad para retener el colorante se podrán diferenciar las células en Gram+ (las cuales tienen capacidad de retener el colorante después del proceso de decoloración) y las Gram- (las cuales no retienen el colorante y por tanto son teñidos con el colorante de contraste el cual es usualmente la safranina. A continuación se muestra la diferenciaestructural en la envoltura de las Gram+ y las Gram-.
Seguido del mordiente, en este caso solución diluido de yodo (lugol), que en el caso de las Gram (+), forma un complejo insoluble. Negroni (2009), nos dice que la función del mordiente es hacer que el colorante principal actúe con mayor intensidad y lograr que se fije más íntimamente a los gérmenes. Además clasifica a los mordientes en físicos,como el calor y en químicos, que incluyen sales metálicas, tanino, fenol, solución yodada o lugol, este último fue el empleado en la práctica, el cual se deja durante un minuto, al igual que el colorante primario. De tal manera que corroboramos que el tiempo empleado del cristal violeta coincide con lo dicho por el autor, mas no el del mordiente, dado que se dejó en exceso por un tiempo de 2minutos.
Luego sigue el agente decolorante que sería una fase importante de la tinción Gram ya que, Según Carlos Ganazo (2005), Este tratamiento decolora a las bacterias gramnegativas, pero no tiene capacidad para disolver el complejo formado en las grampositivas. Finalmente el colorante de contraste, que es de distinto color al primer colorante, el que usamos fue safranina, que tiñe de color rojo alas bacterias que han perdido el primer colorante.
Negroni (2009) dice que el agente decolorante es un solvente orgánico, como el alcohol acetona, ácidos o etanol. Y que el colorante secundario o contracolor es un colorante básico, cuyo color contrasta con el color primario. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejoI2/cristal violeta. La función del alcohol-acetona es quitar el colorante de las bacterias, así si la bacteria conserva el tinte, es Gram positiva y si el tinte no se mantiene es Gram negativa. Para poner de manifiesto las células de estas últimas, se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración decontraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules. La safranina no es crucial para la técnica por lo que puede o no utilizarse. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Ya que al término de la tinción, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo...