MICROBIOLOGÍA. Siembra de un inóculo

SIEMBRA de un inóculo.
Objetivo:
El alumno aprenderá las técnicas más utilizadas para realizar la siembra a partir de una
muestra clínica para su cultivo.
A su vez, con una muestra realizará los pasos previos que se requieren como son la revisión de
documentación que acompaña a la muestra etc…, y que se detallan en el procedimiento.

Material:
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Muestra
Mechero BunsenHoja de datos para el procesamiento de la muestra
Medios de cultivo
Asa bacteriológica

Fundamento
Un inóculo de siembra, es la deposición de una pequeña porción de la muestra en el medio o
en los medios de cultivo, por tanto la inoculación consiste en, tomar una pequeña porción de
la muestra y dispersarla para que crezca con más facilidad en el medio de cultivo. Se puede
inocular en mediolíquido o en medio sólido.
Existen distintos métodos o tipos de siembra, en función de la muestra de partida, del medio
en el que se siembra y de la finalidad del estudio.
Pasos importantes que deben seguirse desde la recepción de la muestra clínica en el
Laboratorio:
 Revisión de la documentación que le acompaña.
 Anotar hora y fecha de entrada de la recepción de la muestra.
 Asignar uncódigo Evaluar el estado de la muestra así como en el recipiente en que ha sido enviada
(hisopo seco, con medio, si existen derrames o rupturas etc..).
 Realizar un frotis y tinción (¡Ojo, si se acompaña sólo un hisopo realizar primero la
siembra!).
 Cultivar en medios adecuados según petición de investigación de enfermedad.
 Identificar el microorganismo y realizar las pruebas desusceptibilidad a
antimicrobianos.

Siembra para inoculación.

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Frotis
Se preparará un frotis a parir de la muestra y se realizará una tinción de Gram (u otra
específica si procede, ejemplo AAR si se solicita la investigación de micobacterias). Las
muestras clínicas no deben ser diluidas con agua o con algún otro diluyente, y si la muestra
contiene mucho material se reduce la cantidadde muestra o se aumenta la zona del frotis. En
algunos tipos de muestra es interesante proceder a una evaluación microscópica de la
presencia de células de respuesta inflamatoria (polimorfonucleares (PMN)) y de células
epiteliales escamosas (CEE) acompañantes.
Para la emisión de un resultado del frotis deben evaluarse al menos 10 campos. Será
interesante también reportar la presencia oausencia de microorganismos predominantes o
flora mixta.

Siembra para inoculación en placa
Con esta técnica pretendemos realizar una distribución, de un inóculo de bacterias sobre una
superficie de agar. Es importante observar las placas antes de sembrar con el fin de
asegurarnos que no contienen ninguna colonia contaminante, burbujas o grumos.
La forma elegida del rayado dependerá directamentede la cantidad de microorganismos
presuntivamente presentes en la muestra o en el inóculo que se siembra.
La superficie del agar debe utilizarse al máximo, realizando los trazos lo más seguido posible
pero sin que lleguen a tocarse, es decir, en forma de estrías muy juntas, pero siempre
sin hacer presión para no dañar el agar.

Muy importante es la zona A donde colocaremos la muestra con unhisopo, pipeta, jeringa o
ASA, y con el asa bacteriológica la distribuiremos de forma homogénea. A partir de aquí se
procederá según el tipo de siembra elegido.

Figura 1

Siembra para inoculación.

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Agotamiento
Esta técnica suele utilizarse en muestras cuya carga microbiana se espera que no sea
demasiado elevada, se procederá a realizar utilizando el asa bacteriológica apartir de la zona
sembrada A, sin esterilizar entremedias del proceso de siembra. La superficie del agar debe
utilizarse al máximo, realizando los trazos lo más seguido posible. Dentro de este tipo de
siembra destacamos, la estría única o en zig-zag, tres giros y cuatro cuadrantes.

Estría única o en zig-zag.
Una vez transferido el inoculo a un área pequeña de la placa, extenderlo en forma...