Microbiologia Tinciones

1. Describa los dos tipos generales de fijación e indique ¿Cuál emplearía para bacterias y para protozoarios?
Las dos principales formas de fijación son por calor, donde se realiza una fina extensión de una gota de muestra liquida sobre un portaobjetos y se deja secar al aire, después, la preparación se pasa rápidamente por la flama de un mechero, el calor mata a la célula y la adhiere alportaobjetos. La otra forma, la otra forma es la química, la cual no daña demasiado al microorganismo y se realiza añadiendo una gota de fijador a la muestra, una gota de ácido oxálico, formaldehido. Así entonces la empleada para bacterias es la fijación por calor mientras que para los protozoarios la fijación química.

2. ¿Porque hay que esperar que los colorantes básicos sean más eficaces encondiciones alcalinas?
Si hablamos un poco sobre las propiedades de la membrana en microorganismos, pensemos que la carga exterior de la célula es positiva ya que se encuentran protones en el exterior de ella misma para poder realizar el intercambio de sustancias que requiere el microorganismo para su funcionamiento, mientras que en el interior se encuentra una carga negativa por OH-disociados así como grupos fosfato en el medio interno de la célula; un colorante básico tiene una carga positiva y en efecto requiere de condiciones básicas para poder funcionar ya que al disminuir la acidez (hacia medio básico) aumenta la carga negativa momentáneamente al exterior de la célula por lo que aumenta la atracción de la membrana por la apetencia de colorantes básicos así como el interior.Cabe mencionar que las células bacterianas son abundantes en ácidos nucleídos, los cuales portan cargas negativas en forma de grupo fosfato; éstos se combinan con colorantes básicos de carga (+). Los colorantes ácidos no tiñen a la célula bacteriana y, por tanto, pueden utilizarse para teñir al fondo con un color de contraste.

3. De tres ejemplos de colorantes básicos, ácidos y neutros.
Entrelos básicos podemos tener: la safranina, la fucsina básica y el cristal violeta.
Entre los ácidos podemos tener: la eosina, la fucsina ácida y el rojo congo.
En los neutros: tenemos el colorante de Romanosky.

4. De las tinciones empleadas en la practica e identifique cual es el colorante primario, el secundario o mordente usado en cada una de ellas.
En la tinción de gram se tiene: que elcolorante primario es el cristal violeta, el colorante secundario es la safranina mientras que el mordente es el lugol.
En la tinción de Ziehl-Neelsen: el colorante primario es la fucsina, mientras que el colorante secundario es un color de contraste de preferencia de color azul.
Tinción de esporas: el colorante primario es el verde de malaquita y el colorante secundario es la safranina.Técnica de rojo congo: el colorante primario es el rojo congo mientras y el mordente de capsula.
Coloración de gránulos metalocromicos: el colorante primario es el colorante de Albert y el mordente es el lugol.



5. Método alternativo de Ziehl-Neelsen
1. Se cubre el portaobjetos con la muestra celular bacteriana en solución de carbofucsina
2. se tiñe durante 30 min aproximadamente.
3. Selava con agua y posteriormente se agrega H2SO4 al 20% hasta que la película sea amarilla.
4. se realiza un tratamiento con alcohol al 95% por 2 min y se lava con agua.
5. se realiza una tinción de contraste con azul de metileno por 30 seg. , se lava y se deja secar.

6. ¿Que sustancias suelen usarse como mordentes? y de 3 ejemplos
Son sustancias que aumentan la afinidad o la atracción entrela célula y el colorante que por lo general forman complejos ejemplos básicos son: ácidos, bases, sales metálicas y lugol.
7. Indique el método usado para tinción de flagelos.
También se le denomina la tinción de Lefson por su descubridor; primero el frotiz se deja secar al aire sin calentamiento para evitar la desproteinización del flagelo (flagelina), se fija químicamente la suspensión...