Microbiologia

INTRODUCCIÓN
Los microorganismos encargados de la degradación de la célula principal componente de la pared celular de las plantas incluyen bacterias, hongos y antinomycetes aerobios o anaerobios, mesófilos y termófilos. (1)
La celulosa es un importante constituyente carbonado de las plantas superiores y probablemente el compuesto orgánico mas abundante en la naturaleza. Debido a que granparte de la vegetación que pasa a formar parte del suelo celulósica, la descomposición de este carbohidrato tiene importancia muy especial en el ciclo biológico del carbono, consecuentemente los microorganismos del suelo que catabolizan la hidrólisis del material vegetal (40-60%) de residuos de plantas influencian el flujo de energía desde ésta la formación de dióxido de carbono y su liberación ala atmosfera como las bacterias y hongos del suelo son los microorganismos mayormente involucrados en el ciclaje del material vegetal. (2)
Estructuralmente la celulosa es un carbohidrato compuesto de unidades de glucosa unidas en una larga cadena lineal por enlaces beta en los atomos de carbono 1,4 de la molécula de azúcar. (3)
Las celulosas se dividen en cuatro clases según su actividad:*Endoglucanasas hidrolizan aleatoriamente los enlaces glucosidicos internos dando como resultado una reducción en la longitud del polímero y un gradual en un incremento en la concentración de azucares reductores.
*Celobiohidrolasas hidrolizan cadenas de celulosa removiendo celobiosa tanto de los extremos reductores como de los no reductores resultando rápidas liberaciones de azucaresreductores.
*Glucohidrolasas ,y glucosidasa estas generan glucosa (4)

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Aislar y evaluar microorganismos degradadores de celulosa a partir de residuos vegetales generados en medios de cultivos.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
*Aislar e identificar microorganismos con actividad celulolitica y amilolitica a partir de residuos vegetales.
*Seleccionar los microorganismos quepresentan mayor actividad celulolitica y amilolitica.
*Realizar las pruebas con los reactivos correspondientes (lugol, rojo congo, NaCl)

MATERIAL | EQUIPO | REACTIVO | MUESTRA |
-8 Cajas petri -1 espátula-1 probeta 25ml-12 tubos de ensaye-gradilla-mechero bunsen -32 puntas azules | -1 balanza analítica-autoclave | -lugol-NaCl -Rojo congo | -10 gr de bagacillo de caña -10gr de paja |PROCEDIMIENTO
1. Dos días antes se esterilizo material y se preparo la solución salina (2 frascos con 90ml de solución salina, 12 tubos de ensaye con 9ml de solución salina).
2. Se preparo el medio agar Czapek y Gelosa almidón para 3 cajas de cada medio.
3. Se peso 10gr de bagacillo de caña y 10gr de paja y cada uno se adiciono en el frasco de solución salina previamente preparada.4. Se hicieron diluciones en 6 tubos de ensaye que contenían la solución salina para bagacillo, se tomo 200 μl del frasco que contenía el bagacillo y se paso al tubo 1que tenia la solución salina ya esterilizada, se tomo otra porción igual del tubo 1 y se paso al tubo 2 y así sucesivamente. Hicimos lo mismo con la paja.
5. Los medios ya preparados anteriormente se adicionaron a las cajasPetri y dejamos gelificar.
6. Se sembró 0.2ml de las 2 últimas disoluciones y se adicionaron a las cajas petri.
7. Se incubaron las placas almidón 48 horas a 28ºC.
8. Se adiciono lugol a las placas de almidón y se observaron.
9. Se incubaron las placas carboximetilcelulosa una semana.
10. Se adiciono rojo congo durante 15 minutos se retiro el colorante.
11. Se volvió ainundar con NaCl por 15 minutos y se observo.
12. Se hicieron el conteo de colonias formadas en cada placa.

DIAGRAMA
Hacer asepsia y salir del laboratorio
Entregar material
Lavar material
Contar las colonias dependiendo en la zona que se encuentren
Las placas con almidón se les adicionan lugol
Retirar el colorante y adicionar NaCl 15minutos
Inundar las placas de medio...