microbiologia

Verde Brillante Bilis 2% Caldo.
Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la técnica del número más probable. 

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gramnegativas a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. 
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.
Fórmula (en gramos por litro)
Instrucciones
  Bilis de buey deshidratada
20.0
Suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de agua destilada. Disolver y distribuir 10 ml por tubo con campanita de Durham.Preparar además, el medio a doble concentración. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
  Lactosa
10.0

  Peptona
10.0

  Verde brillante
0.0133

pH final: 7.2 ± 0.2
Siembra
a.- Para el análisis de coliformes totales en muestras fluidas, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo doble concentración y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentración.
Número 
de tubos
Volumen de lamuestra
Volumen de medio
Concentración 
del medio
3
10 ml
10 ml
Doble
3
1 ml
10 ml
Simple
3
0.1 ml
10 ml
Simple
 b.- Para el análisis de coliformes totales en muestras sólidas (alimentos, cosméticos, fármacos), efectuar diluciones seriadas 10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilución por triplicado en medio de cultivo simple concentración.
Número 
de tubos
Dilución dela muestraVolumen de la muestra
Volumen de medio
Concentración 
del medio
3
10-1
1 ml
10 ml
Simple
3
10-2
1 ml
10 ml
Simple
3
10-3
1 ml
10 ml
Simple
c.- Para análisis de coliformes fecales, a partir de cada tubo positivo en el test presuntivo de coliformes totales (proveniente de Verde Brillante y Bilis 2% Caldo ó Mac Conkey Caldo ó Lauril Sulfato, utilizando la técnica del NMP), o a partirde colonias presentes en diferentes medios, que se presume sean coliformes, transferir una ansada a un tubo con Verde Brillante y Bilis al 2% caldo fresco, incubando a 45 +/- 0.5 ºC y otra en Agua Triptona con incubación a 35-37 ºC, para detectar la producción de indol.
Incubación
a- Para de coliformes totales: a 35-37 °C durante 24 horas.
b- Para coliformes (fecales): a 44.5-45.5 °C durante 24horas.
Resultados 
-Positivo: presencia de gas.
Con el número de tubos positivos, calcular el número mas probable. El resultado se expresa por gramos ó 100 ml de producto
-Negativo: ausencia de gas.
Microorganismos
Crecimiento
Gas
Indol#
Escherichia coli ATCC 25922
+
+*
+*
Enterobacter spp.
+
+
-*
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
+
+*
-*
Salmonella typhimurium ATCC 14028
+-
-
Bacterias no fermentadores de lactosa
+
-
Variable
Staphylococcus aureus ATCC 25923
-
-
-
  +* ó -* 10-25% de cepas negativas o positivas
  # a partir de Agua Triptona
Características del medio
Medio preparado: verde esmeralda, transparente
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación 
x 100g :Código:  B02-107-05
x 500g :Código: B02-107-06

Lactosado Caldo.
Se recomienda como prueba presuntiva para investigar la presencia de bacterias del grupo coliforme en agua, productos lácteos, etc.
Actualmente también está indicado para el preenriquecimiento no selectivo en la búsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos
Fundamento 
Es un medio rico en nutrientes,y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano.
Elextracto de carne y la peptona, son la fuente de carbono y nitrógeno, mientras que la lactosa es el hidrato de carbono. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas, y éste último se demuestra al usar las campanas Durham.
Se lo usa también como medio de preenriquecimiento, porque permite recuperar células injuriadas, diluye sustancias tóxicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de...