Obtención de una preparación antigénica soluble de
Páginas: 7 (1693 palabras)
Publicado: 11 de febrero de 2011
Obtención de una preparación antigénica soluble de
Leptospira interrogans serovariedad Hardjo prajitno cepa Holanda mediante shock térmico y sonicación.
RESUMEN: Cultivo puro de 5 días en medio Cox modificado (250mL) de L. interrogans serovariedad Hardjo prajitno cepa Holanda se sometió a shock térmico y sonicación, previa centrifugación, para la obtención del antígeno soluble, cuantificandolas proteínas por el método de Lowry modificado para microtécnica. La concentración de proteínas para el precipitado obtenido fue de 45.98 µg por cada 50 µL de suspensión antigénica y para el sobrenadante fue de 10.80 µg por cada 50 µL de suspensión antigénica. La especificidad de la suspensión antigénica por la técnica de doble inmunodifusión en gel (Ouchterlony) se hizo reaccionar contrasueros de bovino positivos a esta serovariedad. No se detectó alguna reacción, lo que puede interpretarse como que las proteínas obtenidas por este método no son las inmunodominantes en la superficie de Leptospira.
ABSTRACT: Pure culture of 5 days in modified Cox medium (250ml) of L. interrogans serovar Hardjo prajitno strain Netherlands underwent thermal shock and sonication, previouscentrifugation, to obtain the soluble antigen, quantifying the proteins by Lowry's method modified for microtechnique. The concentration of protein for the obtained precipitate was 45.98 µg per 50 μL of antigenic suspension and the supernatant was 10.80 µg per 50 μL of antigenic suspension. The suspension antigenic specificity by the technique of double immunodiffusion gel (Ouchterlony) was reacting againstbovine serum samples positive to this serovar. Was not detected any reaction, which may mean that the proteins produced by this method are not the inmunodominantes on the surface of Leptospira.
Palabras clave: Leptospira, antígeno, sonicación, shock térmico.
Key words: Leptospira, antigen, sonication, thermal shock.
Introducción
La leptospirosis es una zoonosis de distribución mundial queafecta a los mamíferos tanto domésticos como silvestres, aunque el agente también se ha aislado de otros vertebrados, como aves y anfibios1. La enfermedad puede estar causada por cualquiera de las espiroquetas parásitas clasificadas dentro del género Leptospira.1
Debido a que la leptospirosis es una zoonosis, a los efectos sobre la producción animal se le añade un importante aspecto sanitario.El ser humano no actúa como hospedador de mantenimiento de ninguna serovariedad, por lo que la infección será siempre accidental. 2
En la República Mexicana se han realizado estudios para monitorear la prevalencia de la leptospirosis, principalmente la leptospirosis humana y la bovina, encontrando que la serovariedad predominante en este país es la Hardjo, específicamente la cepa H89, tanto enhumanos como en bovinos.3, 4, 5, 6, 7.
Para efectuar el diagnóstico preciso y certero de la leptospirosis es necesario conocer la dinámica de la infección y así poder obtener la muestra adecuada según la evolución de la enfermedad.8
Se piensa que el lipopolisacárido (LPS) de la cubierta celular es la base de la eficacia protectora de las vacunas elaboradas con células enteras de leptospirasque son usadas para la protección en animales domésticos y en humanos.8
Desafortunadamente, los antígenos LPS tienen una gran variación entre las serovariedades. En contraste con el LPS, se cree que las proteínas de membrana leptospirósicas sean altamente conservadas.8
Las modernas técnicas de laboratorio como la electroforesis, sonicación y ultracentrifugación han permitido el aislamientoy caracterización de fracciones subcelulares tales como: lipopolisacáridos y proteínas totales de la envoltura externa de la pared celular. Por el momento su utilización no es una práctica de rutina. Sin embargo, se vislumbra, en un futuro cercano, su aplicación en la producción de inmunógenos.9
Actualmente hay un gran interés en la caracterización de estas proteínas, para el desarrollo de...
Leptospira interrogans serovariedad Hardjo prajitno cepa Holanda mediante shock térmico y sonicación.
RESUMEN: Cultivo puro de 5 días en medio Cox modificado (250mL) de L. interrogans serovariedad Hardjo prajitno cepa Holanda se sometió a shock térmico y sonicación, previa centrifugación, para la obtención del antígeno soluble, cuantificandolas proteínas por el método de Lowry modificado para microtécnica. La concentración de proteínas para el precipitado obtenido fue de 45.98 µg por cada 50 µL de suspensión antigénica y para el sobrenadante fue de 10.80 µg por cada 50 µL de suspensión antigénica. La especificidad de la suspensión antigénica por la técnica de doble inmunodifusión en gel (Ouchterlony) se hizo reaccionar contrasueros de bovino positivos a esta serovariedad. No se detectó alguna reacción, lo que puede interpretarse como que las proteínas obtenidas por este método no son las inmunodominantes en la superficie de Leptospira.
ABSTRACT: Pure culture of 5 days in modified Cox medium (250ml) of L. interrogans serovar Hardjo prajitno strain Netherlands underwent thermal shock and sonication, previouscentrifugation, to obtain the soluble antigen, quantifying the proteins by Lowry's method modified for microtechnique. The concentration of protein for the obtained precipitate was 45.98 µg per 50 μL of antigenic suspension and the supernatant was 10.80 µg per 50 μL of antigenic suspension. The suspension antigenic specificity by the technique of double immunodiffusion gel (Ouchterlony) was reacting againstbovine serum samples positive to this serovar. Was not detected any reaction, which may mean that the proteins produced by this method are not the inmunodominantes on the surface of Leptospira.
Palabras clave: Leptospira, antígeno, sonicación, shock térmico.
Key words: Leptospira, antigen, sonication, thermal shock.
Introducción
La leptospirosis es una zoonosis de distribución mundial queafecta a los mamíferos tanto domésticos como silvestres, aunque el agente también se ha aislado de otros vertebrados, como aves y anfibios1. La enfermedad puede estar causada por cualquiera de las espiroquetas parásitas clasificadas dentro del género Leptospira.1
Debido a que la leptospirosis es una zoonosis, a los efectos sobre la producción animal se le añade un importante aspecto sanitario.El ser humano no actúa como hospedador de mantenimiento de ninguna serovariedad, por lo que la infección será siempre accidental. 2
En la República Mexicana se han realizado estudios para monitorear la prevalencia de la leptospirosis, principalmente la leptospirosis humana y la bovina, encontrando que la serovariedad predominante en este país es la Hardjo, específicamente la cepa H89, tanto enhumanos como en bovinos.3, 4, 5, 6, 7.
Para efectuar el diagnóstico preciso y certero de la leptospirosis es necesario conocer la dinámica de la infección y así poder obtener la muestra adecuada según la evolución de la enfermedad.8
Se piensa que el lipopolisacárido (LPS) de la cubierta celular es la base de la eficacia protectora de las vacunas elaboradas con células enteras de leptospirasque son usadas para la protección en animales domésticos y en humanos.8
Desafortunadamente, los antígenos LPS tienen una gran variación entre las serovariedades. En contraste con el LPS, se cree que las proteínas de membrana leptospirósicas sean altamente conservadas.8
Las modernas técnicas de laboratorio como la electroforesis, sonicación y ultracentrifugación han permitido el aislamientoy caracterización de fracciones subcelulares tales como: lipopolisacáridos y proteínas totales de la envoltura externa de la pared celular. Por el momento su utilización no es una práctica de rutina. Sin embargo, se vislumbra, en un futuro cercano, su aplicación en la producción de inmunógenos.9
Actualmente hay un gran interés en la caracterización de estas proteínas, para el desarrollo de...
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