OBTENCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

OBJETIVOS
Obtener y procesar proteínas totales utilizando el reactivo de Biuret.
Adquirir destrezas en la aplicación de técnicas colorimétricas.
Adquirir destrezas en el uso del espectrofotómetro.PROCEDIMIENTO
Cuantificación de proteínas con reactivo de Biuret
Luego de haber mantenido previamente las muestras en refrigeración, se tomaron los tubos de ensayo y se sembraron: blanco, patrón,nivel I, nivel II y las muestras. La siembra de estos se hizo según las siguientes indicaciones:
Reactivos y muestras
Blanco
Patrón
Nivel I
Nivel II
Muestra
Agua
10




Patrón proteína (S)

10Control Nivel I


10


Control Nivel II



10

Muestra




10
Reactivo (A)
500
500
500
500
500

Una vez terminada la siembra, se dejaron en reposo por 10 minutos a temperatura. Se llevaron las muestras a unespectrofotómetro BTS a 505 nm y se leyó la absorbancia de cada una. Se tomaron anotaciones y se realizaron los cálculos pertinentes.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN







Muestra (plasma).









Control(nivel ll)
Reacción de Biuret: La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (-CO-NH-) que se destruye al liberarse losaminoácidos. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret. La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debidoa la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.
En la imagen logra observarse elcolor violeta indicando, según lo descrito anteriormente, prueba positiva para proteínas.
Cuestionario
1. Obtener la concentración de proteínas totales para los diferentes analitos.
2. Interprete losresultados obtenidos.
3. De su punto de vista teniendo en cuenta los valores obtenidos en el control de calidad (posibles problemas y soluciones).
4. Qué significado tiene encontrar unas proteínas...