patron interno quimica

Cuantificación de compuestos por
cromatografía: Método del Patrón
Interno

Apellidos, nombre

Fernández Segovia, Isabel (isferse1@tal.upv.es)
García Martínez, Eva (evgarmar@tal.upv.es)

Departamento

Departamento de Tecnología de Alimentos

Centro

ETSIAMN - Universitat Politècnica de València

1 Resumen de las ideas clave
La cromatografía de gases y la cromatografía líquida dealta resolución (HPLC) son
dos técnicas de separación de analitos que permiten identificar y cuantificar un
gran número de compuestos. Para la cuantificación de compuestos, existen
diversas técnicas como la normalización de áreas, el método de patrón externo o
el método de patrón interno. En este objeto de aprendizaje se va a describir cómo
llevar a cabo la cuantificación de compuestos porel método de patrón interno.

2 Introducción
En las técnicas de cromatografía de gases y HPLC, cuando se realiza un análisis, se
obtiene un cromatograma. Un cromatograma es la representación gráfica de la
señal que da el detector al paso de los distintos analitos en función del tiempo. En
un cromatograma se observan una serie de picos que se corresponden con los
analitos detectados. Cadapico sale a un tiempo de retención (tR) determinado y
tiene una altura y área determinadas. El tR es el parámetro que se emplea para
llevar a cabo el análisis cualitativo. Para hacer un análisis cuantitativo se puede
utilizar la altura del pico o el área, siendo éste último el más empleado por su
mayor precisión.

3 Objetivos
Los objetivos de este artículo son que el alumno sea capaz de:Diseñar el procedimiento a seguir para cuantificar compuestos por
cromatografía en columna mediante el método del patrón interno.
Cuantificar un compuesto presente en una muestra a partir de los
cromatogramas de los patrones y de la muestra.

4 Desarrollo
El análisis de alimentos y el control de calidad requieren metodologías que sean
exactas, precisas, muy sensibles y con bajos límites dedetección. Por ejemplo, en
el campo de control oficial de alimentos, las concentraciones de algunos
compuestos tóxicos que es necesario determinar son de magnitudes muy bajas,
por lo que se requieren potentes técnicas de análisis que permitan la identificación
y cuantificación de estos compuestos. En este sentido la cromatografía de gases y
la cromatografía líquida de alta resolución son dos delas técnicas más
adecuadas. Debido a la importancia de estos métodos de análisis, es necesario
saber diseñar procedimientos adecuados para la cuantificación de compuestos
analizados por ambas técnicas.

4.1 Preparación de
cromatogramas

patrones

y

obtención

de

los

Cuando se quiere cuantificar un compuesto presente en una muestra por el
método del patrón interno, los pasos aseguir son los siguientes:
1. Preparar una serie de disoluciones de concentraciones crecientes, del
patrón correspondiente al compuesto a cuantificar. El intervalo de
concentraciones ha de ser similar a la concentración del analito en la
muestra problema.
2. Añadir a cada uno de los patrones y a la muestra una misma cantidad o
concentración de patrón interno. El patrón interno ha de ser uncompuesto
de naturaleza similar al analito a determinar, pero que no esté presente en
la muestra. Por ejemplo, en un análisis de azúcares en fresas un patrón
interno podría ser lactosa, ya que se trata de un azúcar, pero no está
presente en las fresas.
3. Inyectar el mismo volumen en el cromatógrafo de cada una de las
disoluciones patrón que contienen el patrón interno, así como del extractode la muestra que también contiene el patrón interno. De esta forma
tendremos los distintos cromatogramas de los patrones (un cromatograma
para cada disolución patrón) y el cromatograma de la muestra.

Ejemplo 1: Si se quiere determinar un analito cuya concentración en el extracto de
la muestra, se espera que esté comprendida en un margen de 350 a 550 mg/L, se
podrían preparar e inyectar...