PCR Y EXTRACCION DE ADN

44. Amplificación de DNA mediante PCR
(Reacción en Cadena de la Polimerasa)
Gabriel Dorado Pérez
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Campus Universitario de Rabanales,
Edificio Severo Ochoa, 14071-Córdoba

RESUMEN

Las técnicas de biología molecular están basadas en la manipulación y
detección de gran número de moléculas. Dicho con otras palabras, la
tecnología actual nopermite, en general, el estudio de moléculas aisladas
o únicas. Es por ello que uno de los pasos de los proyectos de biología
molecular consiste en la amplificación de secuencias de DNA. La PCR
puede sustituir a la clonación in vivo clásica en muchos casos, siendo en
otros un aliado esencial para simplificar el proceso e incrementar la
probabilidad de éxito. La historia del desarrollo de la PCRes ciertamente
curiosa. La técnica tuvo tanto impacto en el mundo científico, que en 1993
le fue concedido el Premio Nobel de Química a su inventor “oficial”, Kary
B. Mullis, quien describió el proceso en 1985 y 1988. Sin embargo, catorce
años antes (1971 y 1974), el Dr. Molineux, del grupo de Khorana, describió
la misma técnica con exquisito detalle, aunque, lamentablemente,
consideraronque dicha metodología no era funcional. Desde su
“redescubrimiento oficial” en 1985, la PCR se ha consolidado como la
técnica clave de la biología molecular actual.
Palabras clave: amplicón, amplificación exponencial, amplificación logarítmica,
cebador, enzima termoestable, iniciador.
Abreviaturas empleadas. DNA: ácido desoxirribonucleico; BrEt: bromuro de
etidio; LB: medio ricoLuria-Bertani; Na2–EDTA: sal disódica del ácido etilén
diamino tetra-acético; PCR: reacción en cadena de la polimerasa; TAE:
solución amortiguadora Tris-Acético-EDTA; TBE: solución amortiguadora TrisBórico-EDTA.

1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
Las técnicas de biología molecular están basadas en la manipulación y
detección de gran número de moléculas. Dicho con otras palabras, la
tecnología actual nopermite, en general, el estudio de moléculas aisladas o
únicas. Es por ello que uno de los pasos de los proyectos de biología molecular
consiste en la amplificación de secuencias de DNA.
Tradicionalmente, la amplificación del DNA se ha realizado in vivo, mediante
un proceso conocido de forma genérica como clonación. Ésta abarca la
manipulación del DNA, la transformación de células con dicho DNArecombinante y la replicación del DNA huésped en las células hospedadoras
hasta alcanzar un número suficiente que permita su estudio por las técnicas
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clásicas de biología molecular. La clonación clásica in vivo será abordada en
otras prácticas.
El inconveniente fundamental de la tecnología clásica de clonación in vivo
estriba en que suele ser un proceso muy laborioso. Hasta hace poco, unproyecto de clonación clásica in vivo solía requerir el trabajo correspondiente a
una Tesis Doctoral (unos cuatro años y un investigador dedicado). Por suerte,
esta tecnología se ha visto simplificada muy significativamente con el
advenimiento de la amplificación de DNA mediante la llamada Reacción en
Cadena de la Polimerasa (PCR; del inglés, “Polymerase Chain Reaction”).
Podemos considerarla PCR como una clonación in vitro, en el sentido de que
podemos amplificar en un tubo de ensayo una secuencia de DNA determinada
millones de veces y además en un tiempo mínimo de horas o incluso minutos.
La PCR puede sustituir a la clonación in vivo clásica en muchos casos, siendo
en otros un aliado esencial para simplificar el proceso e incrementar la
probabilidad de éxito. En estecapítulos se describirá y analizará la PCR.

3. INVENCIÓN DE LA TÉCNICA DE AMPLIFICACIÓN IN VITRO MEDIANTE
LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
La historia del desarrollo de la PCR es ciertamente curiosa. La técnica tuvo
tanto impacto en el mundo científico (ver aplicaciones más abajo), que en 1993
le fue concedido el Premio Nobel de Química a su inventor “oficial”, Kary B.
Mullis, quien...