Perfil De Elucion

SEPARACION DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLOURESCEINA USANDO CROMATOGRAFIA POR ADSORCION.

Objetivos:
El alumno:
A) Aplicará la técnica de cromatografía por adsorción para la separación de dos colorantes.
B) Comprobará la separación en el perfil de elución.

Introducción:
La cromatografía es un método físico de separación cuyo objetivo es aislar los distintos componentes deuna mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes, en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido) que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido, un soporte (papel, capa fina, columna, etc.) y un analito o muestra que será la sustancia que se va a separar.
La cromatografía se divideen varias categorías en función del mecanismo de interacción del soluto con la fase estacionaria:
A) Cromatografía por adsorción
B) Cromatografía por intercambio iónico
C) Cromatografía de reparto
D) Cromatografía de afinidad
Cromatografía por adsorción:
Se usa una fase estacionaria sólida y una fase móvil liquida o gaseosa, el soluto se adsorbe en la superficie de laspartículas sólidas, entre más fuertemente se adsorba un soluto, más lentamente atraviesa la columna.
El fluido que entra por la columna se llama eluyente, mientras el fluido que sale de la columna se llama eluato.
El proceso del paso de un líquido o un gas a través de una columna cromatografía se llama elución.
A comienzos del año 1903, Mijail Tswett usó columnas de adsorción de líquidos paraseparar pigmentos vegetales. Las disoluciones se hacían pasar a través de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido de un material poroso que interacciona de forma diferente con los componentes de la mezcla, de forma que éstos se separaban en distintas bandas coloreadas a lo largo de la columna.

Resultados:

Tabla No.1 Valores de absorbancia obtenidos para laseparación de azul de metileno y fluoresceína.
Tubo No. | Vol. de elución (mL) | A 493 nm | A 668nm |
1 | 3 | 0.009 | |
2 | 6 | 1.602 | |
3 | 9 | 2.125 | |
4 | 12 | 0.398 | |
5 | 15 | 0.071 | |
6 | 18 | 0.032 | |
7 | 21 | 0.023 | |
8 | 24 | | 0.015 |
9 | 27 | | 0.065 |
10 | 30 | | 0.076 |
11 | 33 | | 0.523 |
12 | 36 | | 1.556 |
13 | 39 | | 2.08 |
14 | 42 | |0.935 |
15 | 45 | | 0.915 |
16 | 48 | | 0.325 |
17 | 51 | | 0.112 |
18 | 54 | | 0.057 |
19 | 57 | | 0.04 |
20 | 60 | | 0.031 |
21 | 63 | | 0.028 |
22 | 66 | | 0.025 |



Gráfica No.1 Perfil de elución de azul de metileno y fluoresceína a 493 y 668 nm

2) En el perfil de elución que se obtuvo, se observa que de la mezcla, el primer compuesto que se separo fue laFluoresceína y una vez terminada esta, se empezó a separar el azul de metileno. Cabe recordar que al terminar de separarse la Fluoresceína, se cambió de fase móvil, de agua a etanol ácido con la cual empezó a separarse el Azul de Metileno debido a que la fluoresceína tiene más afinidad por el agua y el azul de metileno por el etanol ácido.
La curva que dibujada en el gráfico, se debe a que elazul de metileno puede detectarse a la longitud de onda de absorción máxima de la Fluoresceína(493nm), ya que el espectro de absorción del azul de metileno abarca esta longitud de onda, siendo de este 668 nm la longitud de onda de absorción máxima.

Discusión de resultados:
En el perfil de elución se observa que el primer compuesto que se separo fue la fluoresceína, porque cuando la mezcla esadsorbida en la superficie de la Alúmina por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrógeno, efectos inductivos, etc.). La alúmina (Al2(OH)5)2.CO3.H2O ), al contener el grupo CO3 con carga negativa y preparada en medio básico(pH=10) tendrá un comportamiento básico lo

cual permitirá la repulsión entre los grupos que contengan carga negativa en la...