Prásctica 6. Tincion De Gram

GUSTAVO ALDAIR HERNÁNDEZ JUÁREZ
2°A

TÉCNICAS DE LABORATORIO II
l.10


TINCIÓN DE GRAM:

La tinción de Gram es usada para clasificar bacterias sobre la base de sus formas, tamaños, morfologías celulares y reacción Gram (color). A nivel del laboratorio es útil como test para un rápido diagnóstico presuntivo de agentes infecciosos, tanto en muestras como en cultivos en crecimiento, yadicionalmente sirve para valorar la calidad de la muestra clínica. Las bacterias se tiñen Gram positivas (+), Gram negativas (–) o no se tiñen debido a sus diferencias en la composición de su pared y arquitectura celular. Esta técnica pinta las bacterias y resalta sus cualidades externas, lo que hace posible el hacer estas distinciones y cualidades para la vista microscópica.
Las bacterias Gram (+)tienen una gruesa capa de péptido lucano y gran cantidad de ácidos ticónicos que no son afectados por la decoloración con alcohol y (o) acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular está intacta o dañada (por tratamientos antibióticos, edad celular…).Las bacterias Gram (–) tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Esta membrana externa es dañada por el alcohol y/o acetona de la decoloración, permitiendo que el primer colorante acomplejado con iodo escape y sea reemplazado por el contra colorante.
Clásicamente los reactivos utilizados para la realización de latinción de Gram han sido el cristal violeta y el azul de metileno como colorante inicial, la solución de lugar para acomplejar a éste, el alcohol y/o acetona para la decoloración y la safranina o fucsina básica como contra colorante.
Existen una serie de puntos con respecto a un buen control de calidad de las tinciones de Gram, y que deben ser tenidas en cuenta antes de su realización, a saber:· Diariamente se debe comprobar que no existen precipitados ni cristales en la solución de cristal violeta. Si los hay, filtrar antes de su uso.
· La estabilidad de la solución de cristal violeta, alcohol y/o acetona, safranina o fucsina básica es de 1 año y la de la solución de lugar de 6 meses, todas ellas conservadas en frascos cerrados (la evaporación puede alterar su efectividad) atemperatura ambiente.
· Ciertos procedimientos de laboratorio pueden dificultar la interpretación microscópica de la tinción, como son la preparación de extensiones demasiado gruesas, uso de portas que no han sido prelavados o desengrasados, sobrecalentamiento en la fijación y excesivos lavados durante la tinción. Todos los anteriores son causas comunes de pobres resultados en la tinción de Gram.
· Debetenerse en cuenta que no todos los microorganismos observados en una tinción pueden ser cultivados, y al contrario, algunos no observados pero presentes consiguen ser recuperados en el cultivo.
El inventor de esta técnica fue el doctor Hans Christian Gram, que nació en 1853 y falleció en 1938. Doctor y científico danés que se desarrollo principalmente en el campo de la bacteriología a la cuál ledio una gran ampliación, principalmente con la implementación de du método de tinción: “la tinción de Gram”.

Material:
* Yogurt
* 1 yakult
* Palillo de madera
* Porta y cubre objetos
* Microscopio
* Porta y cubre objetos
* Azul de metileno
* Cristal violeta
* Acetona
* Agua
* Mechero bunsen
* Descolorante

Procedimiento:
Hay que hacer amuestra para el microscopio de manera individual para cada una de las muestras:
1) Con el yogurt, hay que colocar un poco sobre e l porta objetos y embarrarlo bien sobre el mismo. A continuación, hay que fijar esto sobre el porta en el mechero bunsen (teniendo cuidado de no mantener la muestra mucho tiempo sobre la flama).
Para continuar; hay que teñir la muestra con el cristal violeta y con el...