practica adn vegetal

 Extracción de ADN vegetal
INTRODUCCION:
. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacerque se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

OBJETIVO :
Los estudiantes extraerán ADN de bananaslicuadas con agua. Una parte de esta
mezcla de banana, luego es tratada con shampoo y sal, mezclada durante 5-10
minutos, y luego escurrida a través de un filtro de café. A lo filtrado se le agrega
alcohol frío y es éste el momento cuando el ADN de la solución de banana se precipita
y se hace visible.
El detergente disuelve los lípidos (moléculas grasas) y las proteínas de la membranacelular, rompiendo las uniones que mantienen la integridad de la misma. De esta
forma se libera el contenido celular. Luego, el detergente forma complejos con los
lípidos y las proteínas, permitiendo que los mismos sean separados del ADN por
filtración. Así se libera el ADN. La sal permite que el ADN precipite en una solución fría
de alcohol y que las cadenas de ADN no se corten.PROCEDIMIENTO:
Materiales:
• 1 tazas o vaso de plástico (por grupo)
• Licuadora
• Una cuchara plástica para medir y mezclar
• 2 filtros de papel de café Nº 2 (conos)
• 20 ml de agua destilada
• Shampoo de color claro
• 1 banana
• Sal de mesa, con o sin Iodo
• 1 pipeta de transferencia plástica o un gotero médico
• 1 tubo de ensayo sellado que contenga 95% de etanol o 91% de alcoholisopropílico
• 1 conservadora con hielo para enfriar los tubos con alcohol
• 1 varilla de vidrio o 1 pipeta Pasteur
Procedimiento para la extracción del ADN
Preparar una solución de banana procesada con sal, agua destilada y shampoo
(detergente) mediante los siguientes pasos:
1. En una licuadora, mezclar una banana por taza de agua destilada (250ml).
2. Licuar por 15-20 segundos,hasta que la solución se mezcle.
3. En una taza, preparar una solución consistente en una cucharadita de té de
shampoo y dos pizcas de sal.
4. Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada.
5. Disolver la sal y el shampoo revolviendo lentamente con la cuchara de plástico
evitando formar espuma.
6. A la solución preparada en el paso 3, agregar tres cucharaditas de té de la mezcla
debanana del paso 1.
7. Mezclar la solución con la cuchara por 5-10 minutos.
8. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la solución de banana, otro
miembro pondrá el filtro Nº 2 de café dentro de otra taza de plástico. Doblar el borde
del filtro alrededor de la taza para que el filtro no toque el fondo de la taza.
9. Filtrar la mezcla vertiéndola dentro del filtro y dejar que lasolución drene por
algunos minutos hasta que sean 5 ml aproximadamente de filtrado para testear.
10. Tomar un tubo de ensayo con alcohol frío. Para mejores resultados el alcohol debe
estar tan frío como sea posible.
11. Llenar la pipeta plástica con la solución de banana y agregarla al alcohol. El ADN
no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol se agrega a la mezcla, los componentes,excepto el ADN, permanecen en la solución mientras el ADN precipita en la capa de
alcohol.
12. Dejar la solución reposar por 2 a 3 minutos sin mover. Es importante no batir el
tubo de ensayo. Se puede observar el ADN blanco el cual precipita en la capa de
alcohol.
13. Cuando se obtienen buenos resultados, habrá suficiente ADN para levantar con
una varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la...