Practica De Bacteriologia. Tincion De Gram
Páginas: 8 (1816 palabras)
Publicado: 7 de septiembre de 2011
UNIVERSIDAD DE LA SALLE BAJIO
MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
TERCER SEMESTRE
BACTERIOLOGIA Y MICOLOGIA VETERINARIA
OSCAR ALFONSO FRAUSTO AGUIRRE
GRUPO 321
PRACTICA 3: TINCION DE GRAM.
PROFESOR M.V.Z. MANUEL CONRADO GONZALEZ CORTES.
LEON, GTO., A 30 DE AGOSTO DE 2011.
Objetivo.-
Conocer las técnicas, procedimientos y controles que se desarrollan en el área de bacteriología dentro deun Laboratorio Clínico. Conocer las diferentes técnicas bacteriológicas aplicables para la identificación de cepas bacterianas.
Introducción.-
Técnicas de tinción.
Los colorantes se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no ha muerto, el procedimiento de la tinción la mata.
Los colorantes más comunes son las sales. Una sal es un compuesto formado por un ion cargadopositivamente y un ion cargado negativamente, las células bacterianas son ricas en ácidos nucleícos, los cuales portan cargas negativas en forma de grupo fosfato, estos se combinan con los colorantes básicos cargados positivamente, lo cual les hace ser los más utilizados en citología bacteriana, los colorantes ácidos no tiñen las células bacterianas y por lo tanto pueden ser usados para impedir alfondo un color de contraste.
Clasificación de tinciones.
Existe una amplia gama de colorantes que se emplean en métodos que son modificaciones de las técnicas de tinción básicas.
La tinción por método de Gram es la más usada para conseguir información de valor y debe hacerse en todos los casos. Esta técnica proporciona información sobre propiedades estructurales de las bacterias quepermiten separarlas en dos grandes grupos: Gram + y Gram -.
Para esta técnica se requiere que sean cultivos jóvenes no mayores a 24 horas, ya que un cultivo viejo libera enzimas por autolisis
Desarrollo de la práctica.
Material.
*
* Mechero de Fisher.
* 3 laminas portaobjetos
* 3 preparados líquidos de cultivo de bacterias.
* Aza Bacteriana.
* Colorante primario: crisolvioleta.
* Sensibilizante: bicarbonato de sodio.
* Mordente: lugol o yodo.
* Decolorante: alcohol acetona.
* Colorante secundario: safranina.
Procedimiento.
Para esta práctica se harán 3 procedimientos:
1. Preparación de un frotis fijo para tinción.
La técnica de tinción de un frotis varía dependiendo del medio de cultivo, ya que puede ser líquido o solido. En esta prácticacorresponde a un cultivo líquido.
Se toma pues la aza bacteriana, se introduce en el tubo donde se tiene la preparación de cultivo, se toma una gota con la aza.
Se extiende la gota sobre el portaobjeto formando una capa fina, evitando preparar un frotis muy grueso. Dejar secar manteniéndolo siempre cerca del mechero para tener una ambiente estéril.
Una vez seco el frotis pasarlo variasveces directamente sobre la flama el lado opuesto de la laminilla a donde se hizo la impregnación. Tener cuidado a que sean solo unas 4 o 5 veces ya que un exceso de calor produciría que las bacterias se modificaran y perdieran sus propiedades lo que nos impedirá saber con exactitud qué tipo de bacteria trabajamos.
2. Tinción.
Los colorantes utilizados para la tinción de Gram son:
1.Colorante primario: cristal violeta.
2. Colorante secundario: safranina.
Una vez realizada una extensión de la bacteria y que ha sido fijada en la laminilla se aplica el colorante primario que es el cristal violeta, poniendo 2 gotas. La tinción se logra cubriendo plenamente la capa de frotis. Al mismo momento se le agrega un Sensibilizante que es bicarbonato de sodio. Se deja secar durante15 segundos y después se enjuaga.
Una vez puesto esto primer colorante se aplica un mordente que es lugol. Se aplica, se deja secar 15 segundos y se lava.
Se aplica para continuar un decolorante. La función de este decolorante es para precisar si corresponde a una bacteria Gram+ y Gram -, es decir, que si la bacteria es Gram- se decolora y al finalizar se tiñe de rojo. El decolorante es...
MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
TERCER SEMESTRE
BACTERIOLOGIA Y MICOLOGIA VETERINARIA
OSCAR ALFONSO FRAUSTO AGUIRRE
GRUPO 321
PRACTICA 3: TINCION DE GRAM.
PROFESOR M.V.Z. MANUEL CONRADO GONZALEZ CORTES.
LEON, GTO., A 30 DE AGOSTO DE 2011.
Objetivo.-
Conocer las técnicas, procedimientos y controles que se desarrollan en el área de bacteriología dentro deun Laboratorio Clínico. Conocer las diferentes técnicas bacteriológicas aplicables para la identificación de cepas bacterianas.
Introducción.-
Técnicas de tinción.
Los colorantes se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no ha muerto, el procedimiento de la tinción la mata.
Los colorantes más comunes son las sales. Una sal es un compuesto formado por un ion cargadopositivamente y un ion cargado negativamente, las células bacterianas son ricas en ácidos nucleícos, los cuales portan cargas negativas en forma de grupo fosfato, estos se combinan con los colorantes básicos cargados positivamente, lo cual les hace ser los más utilizados en citología bacteriana, los colorantes ácidos no tiñen las células bacterianas y por lo tanto pueden ser usados para impedir alfondo un color de contraste.
Clasificación de tinciones.
Existe una amplia gama de colorantes que se emplean en métodos que son modificaciones de las técnicas de tinción básicas.
La tinción por método de Gram es la más usada para conseguir información de valor y debe hacerse en todos los casos. Esta técnica proporciona información sobre propiedades estructurales de las bacterias quepermiten separarlas en dos grandes grupos: Gram + y Gram -.
Para esta técnica se requiere que sean cultivos jóvenes no mayores a 24 horas, ya que un cultivo viejo libera enzimas por autolisis
Desarrollo de la práctica.
Material.
*
* Mechero de Fisher.
* 3 laminas portaobjetos
* 3 preparados líquidos de cultivo de bacterias.
* Aza Bacteriana.
* Colorante primario: crisolvioleta.
* Sensibilizante: bicarbonato de sodio.
* Mordente: lugol o yodo.
* Decolorante: alcohol acetona.
* Colorante secundario: safranina.
Procedimiento.
Para esta práctica se harán 3 procedimientos:
1. Preparación de un frotis fijo para tinción.
La técnica de tinción de un frotis varía dependiendo del medio de cultivo, ya que puede ser líquido o solido. En esta prácticacorresponde a un cultivo líquido.
Se toma pues la aza bacteriana, se introduce en el tubo donde se tiene la preparación de cultivo, se toma una gota con la aza.
Se extiende la gota sobre el portaobjeto formando una capa fina, evitando preparar un frotis muy grueso. Dejar secar manteniéndolo siempre cerca del mechero para tener una ambiente estéril.
Una vez seco el frotis pasarlo variasveces directamente sobre la flama el lado opuesto de la laminilla a donde se hizo la impregnación. Tener cuidado a que sean solo unas 4 o 5 veces ya que un exceso de calor produciría que las bacterias se modificaran y perdieran sus propiedades lo que nos impedirá saber con exactitud qué tipo de bacteria trabajamos.
2. Tinción.
Los colorantes utilizados para la tinción de Gram son:
1.Colorante primario: cristal violeta.
2. Colorante secundario: safranina.
Una vez realizada una extensión de la bacteria y que ha sido fijada en la laminilla se aplica el colorante primario que es el cristal violeta, poniendo 2 gotas. La tinción se logra cubriendo plenamente la capa de frotis. Al mismo momento se le agrega un Sensibilizante que es bicarbonato de sodio. Se deja secar durante15 segundos y después se enjuaga.
Una vez puesto esto primer colorante se aplica un mordente que es lugol. Se aplica, se deja secar 15 segundos y se lava.
Se aplica para continuar un decolorante. La función de este decolorante es para precisar si corresponde a una bacteria Gram+ y Gram -, es decir, que si la bacteria es Gram- se decolora y al finalizar se tiñe de rojo. El decolorante es...
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