practica de tirosinasa 1


INFORME LABORATORIO # 4
TIROSINASA I

OBJETIVOS:
Extracción de la tirosinas del banano y determinación de su actividad.
Determinar la actividad de la tirosinasa, utilizando como sustratoL-Metil Dopa
Comprobar la actividad de la tirosinasa al actuar bajo diferentes concentraciones de la enzima, calor, y presencia del ion cianuro como inhibidor.

PROCEDIMIENTO:
Tubo 1: 1.0 ml extractode enzima / 6ml solución
Tubo 2: 1.5 ml extracto de enzima / 6ml solución
Tubo 3: 2.0 ml extracto de enzima / 6ml solución
Tubo 4: 2.5 ml extracto de enzima / 6ml solución
Tubo A: 1.0 ml extractode enzima + calor / 6ml solución
Tubo B: 1.0 ml extracto de enzima / 6ml solución e inhibidor (cianuro).

NOTA: a todos los tubos se le agrego un volumen constante de 1ml de sustrato de L-MetilDOPA además de el volumen de extracto enzimático y volúmenes variables de solución buffer para completar en cada tubo 6 ml.
Para el caso de lo tubo A el extracto de enzima fue expuesto al calor antes deagregarle el sustrato y en el caso del tubo B se añadieron 10 gotas de cianuro a los 6 ml de solución.





Tabla 1 –Absorbancia para diferentes concentración de extracto de tirosinasa y parala enzima desnaturalizada por calor e inhibido con cianuro, se tomaron medidas en intervalos de quince segundos.5 ml de sustrato.

Tiempo (s)
Tubo 1 Abs(540nm)
Tubo 2
Abs(540nm)
Tubo 3Abs(540nm)
Tubo 4
Abs(540nm)

1.0 ml enzima + 6ml de s/n
1.5 ml enzima + 6ml de s/n
2.0 ml enzima + 6ml de s/n
2.5 ml enzima + 6ml de s/n
0
0,125
0,281
0,100
0,016
15
0,143
0,341
0,132
0,19830
0,178
0,401
0,190
0,259
45
0,179
0,440
0,269
0,320
60( 1 min)
0,205
0,478
0,279
0,384
75
0,240
0,505
0,328
0,427
90
0,267
0,537
0,359
0,476
105
0,279
0,574
0,396
0,534120(2 min)
0,287
0,598
0,430
0,577
135
0,306
0,649
0,468
0,607
150
0,330
0,707
0,514
0,626
165
0,353
0,733
0,534
0,629
180(3min)
0,353
0,764
0,542
0,629
195
0,365
0,777...