PracticaNo
Páginas: 9 (2178 palabras)
Publicado: 9 de abril de 2015
UNIVERSIDAD DE SONORA
DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUIMICO BIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA ll
Practica No. 3 ‘‘Peroxidasa y Polifenol Oxidasa’’
PROFESOR RAFAEL CANNET ROMERO
INTEGRANTES DEL EQUIPO #4
ESTRADA ENCINAS ENCINAS LEIRA ARACELY
FELIX MURRAY KATYA ROCIO
MERAZ ARREDONDO YESICA
HERMOSILLO, SONORA A 10 DE MARZO DE 2015Practica No. 3 ‘‘Peroxidasa y Polifenol Oxidasa’’
INTRODUCCION:
La peroxidasa es una hemoproteína altamente específica para el aceptor de Hidrógeno, que es el Peróxido de Hidrogeno, pero es muy inespecífica en cuanto al sustrato donador que utiliza, que puede ser una de muchas sustancias, por ejemplo: fenoles, aminofenoles, diaminas, indofenoles, leucocoloranes, ascorbato e incluso ciertosaminoácidos como la tirosina.
La reacción se puede describir de la siguiente manera:
Donador reducido + H2O2 --peroxidasa--> donador oxidado + 2H2O
El mecanismo de acción es sumamente parecido al que se propone para la catalasa, a través de la formación de un complejo. Más aún, en este caso son diversos complejos que se forman entre la enzima y el Peróxido de Hidrogeno antes de que sea capaz dereaccionar con el donador reducido.
La polifenol oxidasa (EC. 1. 11. 1. 7) lleva cabo la oxidación directa aeróbica de compuestos mono y difenoles (Tirosina, fenol, p-cresol, 3,4 -dimetilfenol, 4-t-butilfenol). De ahí que recibe nombres como Tirosinasa, Fenolasa, Cresolasa, etc. También puede atacar a o-difenoles y a la adrenalina. Es una enzima con peso molecular de 120 000, con un centro de cobre.La reacción se puede describir de la siguiente manera:
2 o- difenol + O2 --polifenol oxidasa--> 2O-quinona + 2 H2O
La polifenol oxidasa de la papa ataca a los siguientes compuestos en orden de mayor a menor actividad: Ácido Clorogénico, Catecol, Quercetina, Pirogalol, Ácido Cafeico, 3,4- dihidroxifenilalanina, p-Cresol, Tirosina, Esculetina, Rutina, Acido p-Cumarico. Las quinonas resultantes dela reacción de la Polifenol Oxidasa pueden continuar la oxidación y polimerizandose, para dar compuestos finales que son muy complejos y coloridos.
Esta es una de las enzimas responsables del oscurecimiento de ciertos alimentos como la papa, la manzana, el aguacate, etc., al contacto con el oxígeno atmosférico. En el caso de la Tirosina como sustrato, el complejo resultante es la Melanina opigmento oscuro de la piel y el cabello. En ese casi, la Tirosina se oxida primero a Dihidroxifenilalania (DOPA), que luego se cicliza y se oxida a Indol-5,6-quinona. Esta última polimeriza a melanina.
Es difícil distinguir las actividades de las dos enzimas a partir de la misma fuente, ya que ambas pueden atacar a los mismos sustratos. Sin embargo utilizando papa como fuente de las enzimas, la acciónde la Peroxidasa es más rápida, cosa que puede permitir la observación de las dos acciones.
OBJETIVO:
Observar la actividad de las enzimas Peroxidasa y Polifenol Oxidasa en un tubérculo, en este caso la papa así como su inhibición por acción de calor en la enzima que actúa en el catecol y la inhibición por cianuro sobre la enzima que actúa en el pirogalol.
MATERIALES Y MÉTODOS:
Método:
1.Lo indicado en este punto debe hacerse lo más rápidamente posible. Lave y pele una papa chica. Cortarla en pedacitos lo más pequeño posible, y raye la papa para obtener la pulpa. El vaso de precipitado debe estar sobre el hielo, por lo dicho en el fundamento.
2. Coloque la papa molida o rallada en un vaso de precipitado que contenga 100 ml de agua destilada y que haya estado varios minutossumergido en el hielo. Deje reposar por 10 minutos, agitando ocasionalmente.
3. Filtre la mezcla a través de una gasa doble, a un vaso de precipitado que esté sumergido en el hielo. Exprima el pañuelo y descarte la pulpa.
4. Deje reposar el filtrado unos cinco minutos para que el almidón se asiente en el fondo. Decante el líquido para desechar el almidón, y regrese el líquido al baño de hielo. Este...
DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUIMICO BIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA ll
Practica No. 3 ‘‘Peroxidasa y Polifenol Oxidasa’’
PROFESOR RAFAEL CANNET ROMERO
INTEGRANTES DEL EQUIPO #4
ESTRADA ENCINAS ENCINAS LEIRA ARACELY
FELIX MURRAY KATYA ROCIO
MERAZ ARREDONDO YESICA
HERMOSILLO, SONORA A 10 DE MARZO DE 2015Practica No. 3 ‘‘Peroxidasa y Polifenol Oxidasa’’
INTRODUCCION:
La peroxidasa es una hemoproteína altamente específica para el aceptor de Hidrógeno, que es el Peróxido de Hidrogeno, pero es muy inespecífica en cuanto al sustrato donador que utiliza, que puede ser una de muchas sustancias, por ejemplo: fenoles, aminofenoles, diaminas, indofenoles, leucocoloranes, ascorbato e incluso ciertosaminoácidos como la tirosina.
La reacción se puede describir de la siguiente manera:
Donador reducido + H2O2 --peroxidasa--> donador oxidado + 2H2O
El mecanismo de acción es sumamente parecido al que se propone para la catalasa, a través de la formación de un complejo. Más aún, en este caso son diversos complejos que se forman entre la enzima y el Peróxido de Hidrogeno antes de que sea capaz dereaccionar con el donador reducido.
La polifenol oxidasa (EC. 1. 11. 1. 7) lleva cabo la oxidación directa aeróbica de compuestos mono y difenoles (Tirosina, fenol, p-cresol, 3,4 -dimetilfenol, 4-t-butilfenol). De ahí que recibe nombres como Tirosinasa, Fenolasa, Cresolasa, etc. También puede atacar a o-difenoles y a la adrenalina. Es una enzima con peso molecular de 120 000, con un centro de cobre.La reacción se puede describir de la siguiente manera:
2 o- difenol + O2 --polifenol oxidasa--> 2O-quinona + 2 H2O
La polifenol oxidasa de la papa ataca a los siguientes compuestos en orden de mayor a menor actividad: Ácido Clorogénico, Catecol, Quercetina, Pirogalol, Ácido Cafeico, 3,4- dihidroxifenilalanina, p-Cresol, Tirosina, Esculetina, Rutina, Acido p-Cumarico. Las quinonas resultantes dela reacción de la Polifenol Oxidasa pueden continuar la oxidación y polimerizandose, para dar compuestos finales que son muy complejos y coloridos.
Esta es una de las enzimas responsables del oscurecimiento de ciertos alimentos como la papa, la manzana, el aguacate, etc., al contacto con el oxígeno atmosférico. En el caso de la Tirosina como sustrato, el complejo resultante es la Melanina opigmento oscuro de la piel y el cabello. En ese casi, la Tirosina se oxida primero a Dihidroxifenilalania (DOPA), que luego se cicliza y se oxida a Indol-5,6-quinona. Esta última polimeriza a melanina.
Es difícil distinguir las actividades de las dos enzimas a partir de la misma fuente, ya que ambas pueden atacar a los mismos sustratos. Sin embargo utilizando papa como fuente de las enzimas, la acciónde la Peroxidasa es más rápida, cosa que puede permitir la observación de las dos acciones.
OBJETIVO:
Observar la actividad de las enzimas Peroxidasa y Polifenol Oxidasa en un tubérculo, en este caso la papa así como su inhibición por acción de calor en la enzima que actúa en el catecol y la inhibición por cianuro sobre la enzima que actúa en el pirogalol.
MATERIALES Y MÉTODOS:
Método:
1.Lo indicado en este punto debe hacerse lo más rápidamente posible. Lave y pele una papa chica. Cortarla en pedacitos lo más pequeño posible, y raye la papa para obtener la pulpa. El vaso de precipitado debe estar sobre el hielo, por lo dicho en el fundamento.
2. Coloque la papa molida o rallada en un vaso de precipitado que contenga 100 ml de agua destilada y que haya estado varios minutossumergido en el hielo. Deje reposar por 10 minutos, agitando ocasionalmente.
3. Filtre la mezcla a través de una gasa doble, a un vaso de precipitado que esté sumergido en el hielo. Exprima el pañuelo y descarte la pulpa.
4. Deje reposar el filtrado unos cinco minutos para que el almidón se asiente en el fondo. Decante el líquido para desechar el almidón, y regrese el líquido al baño de hielo. Este...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.