practico tinciones






Trabajo Práctico 4:
Identificación de Reticulina, Fibras Musculares y Caracterización del tejido Hematopoyético.




Introducción
La realización de extensiones y tinciones es práctica habitual en el laboratorio. Pese a no realizarse a todas las muestras, al no ser considerado procedimiento de rutina, es necesario en aquellos casos en los que se detectemediante análisis previos, alguna alteración.
En el caso de las impregnaciones metálicas o argénticas, otorgan un fuerte contraste de las fibras reticulares, que no pueden ser mostradas con tinciones que utilizan colorantes como la hematoxilina - eosina. Sin embargo, los métodos que involucran la reducción de metales son a menudo poco confiables y difíciles de realizar, puesto que su óptimo resultado es multifactorial. Lasfallas en esta técnica son comúnmente asociadas a no seguir a cabalidad las instrucciones o que el material de vidrio no se encuentre lo suficientemente limpio.
La correcta realización, así como una buena interpretación de lo observado, permite en muchos casos el diagnóstico de hematopatías. En el caso de la tinción de Giemsa, que es un método habitual para el examen de frotis o corteshistológico, tiene utilidad para poner de manifiesto las rickettsias, por ejemplo, localizadas dentro de las células huéspedes o en frotis de sangre para el examen de protozoos.

¿Cómo actúan estos compuestos a nivel molecular? ¿Qué elementos utilizamos para cada método de tinción? ¿Cómo se generan las interacciones en tejidos como músculo o hematopoyético? Éstas, entre otras interrogantes sedesarrollarán en el presente informe determinando por medio de la experiencia práctica en el laboratorio, qué tiempos son adecuados para cada protocolo de tinción en el caso de las fibras reticulares, las fibras musculares, el tejido hematopoyético y los frotis de sangre. También, analizaremos el fundamento de acción en cada caso, integrando nuestras habilidades investigativas y de trabajo de equipo.Desarrollo Experimental
Marco Teórico
Métodos para identificación de reticulina
La reticulina está presente en las membranas basales del epitelio y de capilares sanguíneos y en las fibras muy finas que forman el estroma de por ejemplo la médula ósea, órganos linfoides, hígado, entre otros. El colágeno de estas fibras en su mayoría corresponde al de tipo III, ya que si la reticulina componelas membranas basales o el estroma, esta contiene una proporción de carbohidratos más alta en relación a las fibras con otro tipo de colágeno.
Las fibras reticulares son isótropas (no tienen birrefringencia) y no se observan a la luz polarizada, por esto uno de los métodos para evidenciarlas es el uso de técnicas de impregnación argéntica, las que mejoran la nitidez de estas.
Los métodospara la tinción selectiva de la reticulina, se basan en la reducción de sales como por ejemplo de oro o plata. De esta manera, la reticulina es teñida en virtud de las hexosas del azúcar que contiene. Estas fibras se hacen visibles por la deposición encima de ellas de plata metálica. Las impregnaciones argénticas muestran la reticulina con un mayor contraste en relación con lo que logra la técnicade PAS o la tinción con tricrómicos. Para lograr la tinción selectiva se siguen los siguientes pasos:

A. Oxidación
Se utiliza permanganato de potasio en este paso, que oxida los grupos hidroxilos adyacente de los azucares hexosas de las glicoproteínas que contienen las fibras reticulares, volviéndolos aldehídos.

B. Decoloración
Busca crear un mayor contraste de las fibras con respectodel fondo. Se realiza con Metabisulfito de potasio

C. Sensibilización
Su fundamento químico es desconocido, pero mejora el contraste en la preparación final. Se realiza con Alumbre férrico.

D.Impregnación
Los aldehídos que resultaron de la oxidación de los grupos hidroxilos contenidos en los carbohidratos reducen el ion plata diamino, [Ag (NH3)2]+, a metal...