Practico N 1 Extracci N De ADN
Páginas: 4 (953 palabras)
Publicado: 10 de junio de 2015
Instituto de Ciencias Biológicas
Biología Molecular. Ing. Bioinformática
PRÁCTICO N°1
Extracción de DNA desde células epiteliales humanas ydesde tejido vegetal
La información necesaria para la construcción de los seres vivos se encuentra almacenada en los ácidos nucleicos. La extracción y purificación de ácidos nucleicos es unrequisito imprescindible para realizar diversas técnicas de biología molecular, para su análisis y/o manipulación, en áreas tales como la medico-forense, silvoagrícola, animal y biotecnológica, entre otras.La extracción comienza con la lisis de las células cuyo DNA se desea purificar. Este paso se realiza mediante un detergente aniónico que solubiliza los componentes celulares. Esta lisis se realiza enpresencia de inhibidores de nucleadas, que garantizan la integridad del DNA; esto es, impiden o limitan la acción de las DNAsas presentes en las células o contaminantes del medio. Rotas las células,su contenido es liberado al medio tamponante que las contiene, por lo que es necesario separar el DNA de entre restos celulares (debris) y de los otros componentes moleculares (RNA, carbohidratos,proteínas, lípidos y otras sustancias en menor proporción). La extracción de ácido desoxirribonucleico desde esta mezcla, se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargasnegativas del DNA, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. El RNA presente se elimina mediante tratamiento con RNAsa. Finalmente, el DNA se aísla mediante precipitación en presenciade alcohol. El sedimento obtenido es resuspendido en agua (o en una solución tamponada).
El método clásico de purificación de ácidos nucleicos se basa en el uso de disolventes orgánicos tóxicos.Entre estos, el más utilizado es la extracción mediante fenol/cloroformo. Esta mezcla denatura las proteínas y causa su precipitación. Recientemente se han desarrollado métodos alternativos que emplean...
Instituto de Ciencias Biológicas
Biología Molecular. Ing. Bioinformática
PRÁCTICO N°1
Extracción de DNA desde células epiteliales humanas ydesde tejido vegetal
La información necesaria para la construcción de los seres vivos se encuentra almacenada en los ácidos nucleicos. La extracción y purificación de ácidos nucleicos es unrequisito imprescindible para realizar diversas técnicas de biología molecular, para su análisis y/o manipulación, en áreas tales como la medico-forense, silvoagrícola, animal y biotecnológica, entre otras.La extracción comienza con la lisis de las células cuyo DNA se desea purificar. Este paso se realiza mediante un detergente aniónico que solubiliza los componentes celulares. Esta lisis se realiza enpresencia de inhibidores de nucleadas, que garantizan la integridad del DNA; esto es, impiden o limitan la acción de las DNAsas presentes en las células o contaminantes del medio. Rotas las células,su contenido es liberado al medio tamponante que las contiene, por lo que es necesario separar el DNA de entre restos celulares (debris) y de los otros componentes moleculares (RNA, carbohidratos,proteínas, lípidos y otras sustancias en menor proporción). La extracción de ácido desoxirribonucleico desde esta mezcla, se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargasnegativas del DNA, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. El RNA presente se elimina mediante tratamiento con RNAsa. Finalmente, el DNA se aísla mediante precipitación en presenciade alcohol. El sedimento obtenido es resuspendido en agua (o en una solución tamponada).
El método clásico de purificación de ácidos nucleicos se basa en el uso de disolventes orgánicos tóxicos.Entre estos, el más utilizado es la extracción mediante fenol/cloroformo. Esta mezcla denatura las proteínas y causa su precipitación. Recientemente se han desarrollado métodos alternativos que emplean...
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