Pre practica 3 Hacer

CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL
FUNDAMENTOS DE MICROBIOLOGÍA
PRACTICA No. 3
TEMA: TRABAJO EN
MICROORGANISMOS

AREA

ESTERIL

-MANIPULACIÓN

-

SIEMBRA

DE

OBJETIVO: Con esta práctica se pretende que el estudiante se aprenda y se familiarice con
las técnicas empleadas en Microbiología para el cultivo y manipulación de microorganismos
en condiciones de esterilidad. Interiorizar al alumno en elreconocimiento de los materiales
empleados en la siembra de microorganismos.
INTRODUCCIÓN
El laboratorio de microbiología es un espacio donde se trabaja con microorganismos, por lo
que es importante contar con un ambiente limpio y ordenado, y realizar las actividades con
técnicas asépticas, permitiendo de esta manera obtener cultivos puros para luego cultivarlos
a gran escala. Aunque losmicroorganismos presentes en las muestras analizadas no se
consideren patógenos deben ser manipulados con precaución por su potencial
patogenicidad.
Al encontrarse los microorganismos ampliamente distribuidos en los ecosistemas: el aire, el
agua, el suelo y otros organismos vivos, estos pueden ser aislados de estos ambientes en
el laboratorio, para lo cual se requiere simular las condiciones ambientales dondese
desarrollan y proveer de los requerimientos nutricionales. Los medios de cultivo son
productos que nos permiten contribuir con los aportes nutricionales indispensables para el
crecimiento de los microorganismos, como son: agua, nutrientes orgánicos (hidratos de
carbono, aminoácidos, vitaminas, etc); nutrientes inorgánicos (fósforo, nitrógeno, magnesio,
azufre, etc).
Además los medios decultivo contienen componentes adicionales que les dan las
características específicas para poder identificar el desarrollo de microorganismos por los
cambios que sufren cuando se desarrollan estos. Esto componente pueden ser tampones,
indicadores de pH, y solidificantes como agar-agar. Este último componente ha permitido
clasificar los medios de cultivo en medios sólidos y medios líquidos, dependiendode la
presencia o ausencia del agar.
Para aislar los microorganismos es necesario introducir una porción de muestra (inóculo) en
un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación, a esto se conoce con el término de sembrar o inocular. Una vez sembrado el
medio de cultivo, se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
Existen distintastécnicas para la siembra en el laboratorio de microbiología:
Siembra en medios sólidos.- el objeto es obtener colonias aisladas
1. Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el
mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios.
2. Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión.Una vez
solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la
capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.

3. Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido,
se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de unaespátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de
cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios
estrictos.
4. Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se
deja solidificar. Mediante esta técnica se pueden realizar diferentes procedimientos.
a. Procedimiento A.- Consiste en cargar el ansa con lamuestra y hacer estrías
paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el ansa, se
enfría, se gira la placa a 90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área
sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa. Por último, sin
quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.
b. Procedimiento B- Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema...