Preparación de medios de cultivos

PRACTICA No 1 “PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO”
EQUIPO 4

INTRODUCCIÓN

La esencia de la microbiología la integran dos clases de operaciones: el aislamiento y el cultivo, que es el crecimiento de poblaciones microbianas en ambientes artificiales medios de cultivo) bajo condiciones de laboratorio.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentesque crean las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos.
La diversidad metabólica de estos es enorme. Por ello, la variedad de medios de cultivo es también amplia, y no existe un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos que son cultivables en el laboratorio, ya que muchos de ellos no lo son en ningún medio conocido. (Gamazo Carlos, Lopez-Goñi, Díaz Ramón, 2005,Manual practico de Microbiología, Ed.: Masson)

OBJETIVO

Conocer: términos de uso frecuente en microbiología relacionados con el cultivo de las bacterias; procedimiento para la preparación de distintos medios de cultivo utilizados para el aislamiento e identificación de microorganismos.

MATERIALES Y METODOS

Desinfectar mesa de laboratorio, con jabón líquido posteriormente aplicar alcohol.Se trabajo con los medios: AGAR PAPA DEXTROSA, AGAR NUTRITIVO, AGAR MAC CONKEY en forma deshidratada. De acuerdo a las instrucciones del fabricante se realizaron los cálculos correspondientes para las 80 cajas petri a prepara con 10ml cada una del medio correspondiente. Así que se pesaron 18.4g de AGAR NUTRITIVO, 40g de AGAR MAC CONKEY, 31.2 de AGAR PAPA DEXTROSA proporciones que fuerondisueltas en agua des ionizada libre de inhibidores del crecimiento en matraces con capacidad de 1 L. Dichas soluciones fueron homogenizadas a través de la agitación en parrillas eléctricas hasta su ebullición. Tapamos los matraces con tapones y papel manila para evitar la contaminación y dejamos que se enfríen para después esterilizarlos en la autoclave a 121 °C durante 15 minutos.
Finalizada laesterilización se dejaron enfriar a temperatura ambiente para después verter en las cajas petri en un ambiente aséptico es decir en la proximidad de la llama del mechero Bunsen dentro de un radio no mayor a 30cm de esterilidad.
Para hacer esta operación se retira el tapón del matraz, sin dejarlo en la mesa, y se pasa por la flama del mechero la boca de éste, luego se levanta la tapa de la caja dePetri estéril, solamente lo necesario para permitir la entrada del cuello del matraz para vaciar el agar. Inmediatamente se vuelve a tapar la caja Petri. Volver a flamear la boca del matraz y taparlo nuevamente si es que aún contiene medio de cultivo.
Es necesario mover ligeramente la caja para que el medio se distribuya uniformemente.
Se formaron paquetes con cinta masking de las cajas petri quefueron sometidas a la prueba de esterilidad incubando las cajas de AGAR NUTRITIVO, AGAR MAC CONKEY por 24 hrs a 37 °C y las de AGAR PAPA DEXTROSA por 24 hrs a 28 °C

Finalmente los colocamos en el refrigerador.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Debemos trabajar de forma ordenada y rápida ya que los medios comenzaron a solidificarse en los matraces antes de terminar de llenar las cajas petri.
Alfinalizar no todas las cajas petri preparadas pasaron la prueba de esterilidad.
Consideramos que esto se debe en parte a las propiedades cada medio como a la forma en que llevamos a cabo su preparación y vertimos en las cajas petri.

Fig. 2 Agar Mac Conkey

Fig. 1 Agar nutritivo

Aprendimos que los diferentes tipos de medios de cultivo se clasifican de acuerdo al objetivo para el cual seutilizan como:
*Químicamente definido: Crecimiento de quimio autótrofos y foto autótrofos, ensayos microbiológicos
* Complejo: Crecimiento de la mayoría de los microorganismos quimo heterótrofos.
* Reductor: Crecimiento de anaerobios estrictos
* Selectivo: Supresión de microorganismos no deseados; favorece el crecimiento de los microorganismos deseados
* Diferencial: Diferenciación de...