Preparacion de medios de cultivo

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PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO

Objetivos Comprender la metodología de preparación de medio de cultivo utilizada habitualmente en los laboratorios de cultivo in Vitro. Preparar algunos delos medios de cultivo necesarios para las siguientes prácticas a partir de soluciones stock concentradas. Introducción De entre la gran diversidad de medios de cultivo in vitro utilizadoshabitualmente, el medio Murashige y Skoog (MS) es el medio más conocido. Se elaboró tomando el cultivo in vitro de tabaco como modelo y siguiendo un procedimiento cuantitativo se determinaron las concentracionesmas adecuadas de todos los nutrientes. El medio MS es apto para la mayoría de las especies, por lo que es de amplia utilización, excepto para las más sensibles a la salinidad ya que se caracteriza portener una elevada concentración salina.. En esos casos puede recurrirse a otros medios o simplemente utilizarlo diluido (1/2 MS, 1/4 MS). Tabla 1. Composición del medio de cultivo MS y preparación apartir de soluciones stock concentradas Macronutrientes NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O CaCl2.aq KH2PO4 KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H20 Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O 1.65 g/l 1.9 g/l 0.37 g/l 0.33 g/l 0.17 g/l 0.83mg/l 6.2 mg/l 22.3 mg/l 8.6 mg/l 0.25 mg/l 0.025 mg/l X100 10 X10 100 Concentración ml/L Solución stock

Micronutrientes

CoCl2.6H2O Hierro Na2.EDTA FeSO4.7H2O Vitaminas Inositol Acido NicitinicoPiridoxina HCl Tiamina HCl Glicina

0.025 mg/l 37.3 mg/l 27.8 mg/l 100 0.5 0.5 0.1 2 x200 5 x200

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Los distintos medios de cultivo pueden prepararse a partir de soluciones concentradas (verdatos en la tabla) o bien a partir de productos comerciales preelaborados (Sigma-Aldrich…). A estos elementos se puede añadir (según especifique el protocolo que estamos aplicando): sacarosa (como fuentede C), reguladores de crecimiento y gelificante. Material Soluciones stock Pipetas y ayudante de pipeteado Probetas (de volumen adecuado para el volumen de medio a preparar) Erlenmeyer (de...
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