Preparacion De Medios De Cultivo

Introducción

En este laboratorio prepararemos un medio de cultivo para la Salmonella y shigella, haremos el medio de cultivo en placas de petri (3 en total del grupo), tubos de ensayo rectos (6 en total del grupo) y tubos de ensayo inclinados (6 en total del grupo), para esto debemos saber que un medio de cultivo es un material alimenticio usado en laboratorio para el desarrollo demicroorganismos, este una vez preparado se puede inocular, es decir, se le pueden incorporar organismos y luego se incuba en condiciones favorables para el crecimiento microbiano. (1)
Los medios de cultivo deben contener los factores requeridos para el crecimiento, nutrientes y no deben tener microorganismos contaminantes. En los medios de cultivo el agar es el principal agente de solidificación utilizado,este se disuelve por completo a 100°C y se solidifica al enfriarse a 40°C, en función de su consistencia se clasifican en:

1) Líquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote y en su formulación no tienes agar.
2) Semisólidos: Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias y contienen en su formulación 0,5% de agar.
3) Sólidos: Estos inmovilizan las celular, deesta forma les permiten crecer formar masas aisladas visibles (colonias), contienen en su formulación de 1,5 a 2,0% de agar.

Objetivos

 Establecer los fundamentos y la técnica para preparación de medios de cultivo.

 Conocer la clasificación, uso y aplicación de los medios de cultivo.

 Preparar el medio de cultivo asignado, de manera que logremos manejar los procedimientos requeridos(uso de la autoclave, cantidades, etc.).

Marco Teórico

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.(2)

Fundamento

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, queinhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndosecolonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestraen Selenito caldo (B02-120-05). (2)

Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo. Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-114-05). (2)
Incubación
Durante24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis. (2)
Características del medio
Medio preparado: rojo naranja. (2)
Almacenamiento
Medio deshidratado: a10-35 ºC. (2)

Materiales

Agar para Salmonella y shigella
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 5.0 Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50°C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutosen la estufa.
Extracto de carne 5.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales biliares 8.5
Citrato de sodio 8.5
Tiosulfato de sodio 8.5
Citrato férrico 1.0
Agar 13.5
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
pH final: 7.0 ± 0.2

• Agar para salmonella y shigella (en la parte superior se muestra su composición y las instrucciones de uso): 12 gramos.
• Papel
• Balanza...