Prueba API 20E

UNIVERSIDAD DE PUERTO RICO
CAROLINA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES
BIOL 3704

PRUEBA API 20 E

La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 pruebas bioquímicas estandarizadas y miniaturizadas y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficazy de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta.

Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras o galerías se incuban a 37°C y por efecto del metabolismo bacteriano seproducen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos.

La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color aparecido.
I. Batería de pruebas incluidas y tablas de lectura con coloraciones positivas y negativas
Pueba
Reacción / EnzimasNegativo
Positivo
ONPG
beta-galactosidasa
sin color
amarillo
ADH
arginina deshidrolasa
amarillo
rojo o naranja
LDC
lisina descarboxilasa
amarillo
rojo o naranja
ODC
ornitina descarboxilasa
amarillo
rojo o naranja
CIT
utilización del citrato
verde
azul oscuro o turquesa
H2S
producción de H2S
sin precipitado negro
precipitado negro
URE
ureasa
amarillo
rojo o naranja
TDAtriptófano desaminasa
amarillo
marrón-rojo
IND
producción de indol
amarillo
color rosa o anillo rosa-rojo
VP
producción de acetoína (Voges-Proskauer)
sin color
rosa-rojo
GEL
gelatinasa
sin difusión
difusión de pigmento
GLU
fermentación/oxidación de glucosa
azul o verde
amarillo
MAN
fermentación/oxidación de manitol
azul o verde
amarillo
INO
fermentación/oxidación de inositolazul o verde
amarillo
SOR
fermentación/oxidación de sorbitol
azul o verde
amarillo
RHA
fermentación/oxidación de ramnosa
azul o verde
amarillo
SAC
fermentación/oxidación de sacarosa
azul o verde
amarillo
MEL
fermentación/oxidación de melobiosa
azul o verde
amarillo
AMY
fermentación/oxidación de amigdalina
azul o verde
amarillo
ARA
fermentación/oxidación de arabinosa
azulo verde
amarillo
OX
citocromo oxidasa
 
 
Procedimiento

I. Preparación de la suspensión bacteriana

Tomar una colonia bien aislada del microorganismo y resuspenderla homogéneamente en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estéril.

II. Inoculación y Lectura de la Prueba

Cada microtúbulo (fig. 1) consiste de un tubo y una cúpula (parte aerobia).Fig. 1 Tira de API 20E donde se aprecia los microtúbulos.
Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula, de todos los pocillos.
Llenar la cúpula de los tubos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.
Llenar con aceite mineral las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.
Poner la tira en su propia cámara húmeda deincubación. Previamente poner agua (5 ml) en los espacios de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación.
Incubar a 37 °C durante 18-24 h.
La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada microtubo con los de las tablas de lectura (tabla I y fig. 2).
Y anotando el resultado como positivo o negativo.

Fig. 2 Tabla de lectura de colores para API20E.

III. Revelado de pruebas que requieren reactivos
Para la lectura se tienen en cuenta los siguientes criterios:
Si la glucosa da negativo y las pruebas positivas son 2 o menos de 2, no hay que añadir reactivos.
Si la glucosa es positiva y/o 3 o más pruebas son positivas se revelan los test que requieren reactivos:

TDA
Añadir una gota de FeCl3 10 % (cloruro férrico). Positivo = color...