Quimioluminiscencia y fluorescencia

PRACTICA #1

MANEJO DE UV – VIS

OBJETIVO:
• Definir y aclarar los conceptos básicos de la radiación electromagnética.
• Conocer los componentes y el funcionamiento de un espectrofotómetro UV - Vis.

FUNDAMENTO:
*Calibración; es un conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones especificadas, la relación entre los valores de magnitudes indicados por un instrumento o sistema demedición, o valores representados por una medida materializada o un material de referencia y los correspondientes valores aportados por patrones.
*Espectrometría Ultravioleta - Visible; también denominado espectrofotometría UV – Vis, implica la espectroscopia de fotones en la región de radiación Ultravioleta - Visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el UV cercano y elinfrarrojo [IR] cercano). En esta región del espectro electromagnético, las moléculas se someten a transiciones electrónicas.
Esta técnica es complementaria de la espectrometría de fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometría de absorción mide transiciones desde el estado basal al estado excitado.
-Aplicaciones:
• Utilizadohabitualmente en la determinación cuantitativa de soluciones de iones metálicos de transición y compuestos orgánicos muy conjugados.
*Radiación Electromagnética; es una combinación de campos eléctricos y magnéticos oscilantes, que se propagan a través del espacio transportando energía de un lugar a otro. A diferencia de otros tipos de onda, como el sonido, que necesitan un medio material para propagarse,la radiación electromagnética se puede propagar en el vacío. Está formada por la combinación de campos eléctricos y magnéticos, que se propagan a través del espacio en forma de ondas portadoras de energía.
Las ondas electromagnéticas tienen las vibraciones perpendiculares a la dirección de propagación de la onda. Por tal motivo, se las clasifica entre las ondas transversales. Las ondaselectromagnéticas viajan a través del espacio, y no necesitan de un medio material para propagarse.
*Longitud de onda; “λ” es la distancia que recorre la onda en el intervalo de tiempo transcurrido entre dos máximos consecutivos de una de sus propiedades.
*Energía; tiene diversas acepciones y definiciones, relacionadas con la idea de una capacidad para obrar, transformar o poner en movimiento. En física,“energía” se define como la capacidad para realizar un trabajo.
*Espectrofotómetro; es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos.
Hayvarios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o espectrofotómetro de masa.
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:
1. Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.
2. Indicarindirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la muestra
-Componentes de un espectrofotómetro:
• Fuente de luz
Aquella que ilumina la muestra y debe cumplir con condiciones como estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio (también llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón ylámpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atómicos.
• Monocromador
Aquel que aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.
Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente...