reacciones de aglutinacion


Reacciones de Aglutinación y Hemaglutinación pasiva
Práctica 2


1. Introducción

Las reacciones de aglutinación consisten en la agregación de material en partículas, tales como células o material sintético, por los anticuerpos llamados aglutininas. La reacción toma lugar sobre la superficie de las partículas que poseen el antígeno disponible para los sitios de unión específica de losanticuerpos. La aglutinación es un ejemplo de una reacción inmune secundaria.

El uso práctico de los procedimientos de aglutinación se ha expandido de las áreas de la infectología e inmunohematología para el estudio de enfermedades infecciosas, autoinmunes, ensayos endócrinos y otros. Las técnicas clásicas de aglutinación directa han dado lugar a una variedad de técnicas que involucran elrecubrimiento de partículas portadoras con antígeno (o anticuerpo), ya sea por procesos de adsorción pasiva o a través de la unión covalente de los antígenos al portador, mediante una manipulación química.

La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos (que en este caso son anti-T. pallidum) de produciraglutinación específica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los correspondientes antígenos. En el suero existen anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que son capaces de aglutinar glóbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con glóbulos rojos no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan mediante tratamiento con 2-mercaptoetanol.2. Objetivos

Comprender las bases teóricas de la reacción de aglutinación.
Describir el principio de la hemaglutinación inversa y el uso eritrocitos como fuente de antígenos.
Conocer las distintas formas de reacciones basadas en la aglutinación.
Realizar diluciones seriadas en microplacas.

3. Antecedentes

Bordet propuso que la aglutinación tomaba lugar en dos fases: a) la combinaciónespecífica del anticuerpo y el antígeno y b) la agregación visible de las partículas. Ambas fases son mediadas por la atracción específica entre el anticuerpo y el antígeno. Las partículas tales como los eritrocitos y las bacterias, poseen cargas ligeramente negativas en suspensión (potencial z) y se repelen unos a otros. La reducción de la fuerza iónica mediante proteínas u otras sustanciasinorgánicas, reduce las distancias entre las partículas, permitiendo la formación de puentes y de una malla del complejo Ag-Ac visible: la aglutinación.

Aunque la carga es importante para determinar que la aglutinación sea completa, es evidente que otros efectos juegan un papel en la aglutinación de las partículas por los anticuerpos. La viscosidad del medio de prueba, por ejemplo,aumenta la aglutinación.

La principal desventaja del fenómeno de aglutinación es que la reacción es semi-cuantitativa. Sin embargo, el hecho de que numerosos sistemas permiten reacciones de aglutinación, la simplicidad básica del sistema de aglutinación desarrollado en la actualidad y la alta sensibilidad de esta reacción, la hace de amplia aplicación y uso.

La exitosa aplicación de lasreacciones de aglutinación para la detección de antígenos o anticuerpos, requiere una partícula estable, un antígeno puro y un anticuerpo específico. Generalmente, el uso del fenómeno de aglutinación también requiere el conocimiento de la posibilidad de que la reacción se realice. Los anticuerpos IgM en el medio de prueba usualmente agregan al antígeno sobre las partículas, en base al tamaño de lamolécula de IgM, mientras que los anticuerpos de tipo IgG por sí mismos, no pueden completar la reacción. Se dice que la IgM es unas 750 veces más eficiente que la IgG en las reacciones de aglutinación.
También debe tenerse en mente que el llamado fenómeno de zona (pro-zona) puede contribuir a que la reacción de aglutinación no sea completa, aún con títulos adecuados de anticuerpos IgM en el medio....