TINCION DE GRAM

• Preparar un extendido fino del material a colorear y dejar secar al aire.
• Fijar al calor, pasando el preparado 3 o 4 veces dentro de la llama del mechero Bunsen.
• Cubrir el portaobjeto con cristal violeta durante 1 minuto y lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
• Cubrir el portaobjeto con solución de lugol durante 1 a 2 minutos y lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
• Sostener el portaobjetos entre los dedos pulgar e índice ydecolorar con alcohol-acetona (10 segundos). La decoloración es el paso más crítico del procedimiento de esta técnica, la tendencia a sobredecolorar hace que las bacterias Gram positivas aparezcan Gram negativas.
• Lavar inmediatamente el portaobjetos con agua corriente para remover el alcohol-acetona y frenar la decoloración. Eliminar el exceso de agua.
• Cubrir el frotis con solución de fucsina o safranina durante 30 - 60 seg. Lavar con agua corriente.
• Control: Gram positivo:Staphylococcus aureus. Gram negativo: Escherichia coli.
Reactivos:
- Solución 1: sol. madre de cristal violeta. Disolver 10 grs. de colorante en 100 ml de alcohol 95%. Guardar en botella de vidrio durante 1 año.
- Solución de trabajo: filtrar 10 ml de la solución madre y agregar 40 ml de solución recién filtrada de oxalato de sodio al 1% o de agua destilada.
- Lugol: disolver 25 gr. de iodo cristalino + 50 gr IK + 500 ml de agua destilada. Guardar en botella color caramelo.
- Decolorante:partes iguales de etanol al 95% y acetona. Guardar en frasco color caramelo a temperatura ambiente.
- Contracolorante:
a) Safranina: tomar 20 ml de solución de safranina al 2.5% en etanol al 95% y agregar 180 ml de agua destilada.
b) Fucsina básica: disolver 0.1 o 0.2 gr de fucsina básica en 100 ml de agua destilada. Guardar en botella oscura durante 1 año.

GRAM WIEGERT

Recomendado para observar quistes de Pneumocystis carinii.
• Fijar con metanol 3 minutos.
• Cubrir con [continua]

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(2011, 04). Reactivos Utilizados En Un Laboratorio. BuenasTareas.com. Recuperado 04, 2011, de http://www.buenastareas.com/ensayos/Reactivos-Utilizados-En-Un-Laboratorio/1949220.html

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