Recuento De Laboratorio

NMP PARA LA DETERMINACION DE COLIFORMESY COLIFORMES FECALES EN AGUAS Sección Microbiología de Alimentos PRT-712.03-005

Fecha emisión: 23-08-2002 Revisión: 5 Fecha revisión: 31-08-2010 Página 1 de 6

1.

OBJETIVO

Este método es utilizado para estimar la densidad de bacterias del grupo coliformes y conocer la calidad sanitaria en aguas crudas 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE

Esteprocedimiento se aplica a aguas crudas y agua de mar 3. FUNDAMENTO

Los métodos utilizados en la determinación de E. coli, coliformes totales y coliformes fecales como microorganismos indicadores de la calidad sanitaria de agua, se basan en la fermentación de la lactosa. El método de número más probable NMP, es un método estadístico, compuesto por una etapa presuntiva y confirmativa. El ensayoconsiste en sembrar diluciones seriadas de la muestra en medios líquidos. Basándose en la combinación de tubos positivos se puede estimar el número de microorganismos presentes con el uso de la tabla estadística aportada por la referencia 4. 4.1 REFERENCIAS Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 21 ª Ed.2005. Capítulo 9. 9221 B y 9221 E.1 página 9-49, 9-50 y 9-51. TERMINOLOGÍAGrupo coliformes El grupo coliformes incluye bacilos gram negativos, aeróbios y anaeróbios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa formando ácido y gas dentro de 48 hrs.a 35ºC. Este grupo incluye a los géneros: Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter. 5.2 Grupo coliformes fecales Coliformes fecales se definen como bacilos gram negativos aeróbios y anaeróbios facultativos,no esporulados, que fermentan la lactosa formando ácido y gas dentro de 24 hrs. a 44,5 ± 0,2ºC. En la actualidad se utiliza el grupo coliformes fecales, especialmente para calificar sanitariamente la calidad del agua.

5. 5.1

NMP PARA LA DETERMINACION DE COLIFORMESY COLIFORMES FECALES EN AGUAS Sección Microbiología de Alimentos PRT-712.03-005

Fecha emisión: 23-08-2002 Revisión: 5 Fecharevisión: 31-08-2010 Página 2 de 6

6. 6.1 6.1.1 6.1.2 6.1.3 6.2 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.3 6.3.1 6.3.2 6.3.3 6.3.4 6.3.5 6.4 6.4.1 6.4.2 6.4.3 6.4.4 6.4.5

MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS EQUIPOS Incubadora a 35º ± 0,5ºC Baño de agua termorregulado con agitación a 44,5º ± 0,2º C Termómetros calibrados con graduaciones de 0,1ºC CEPAS CONTROL Control positivo Control negativo :cepa de Escherichia coliATCC 25922 :cepa de Staphylococcus aureus. ATCC 6538

Control negativo coliformes fecales: cepa Enterobacter aerogenes ATCC 13048. MATERIALES Pipetas graduadas de 1, 5 y 10. Tubos o botellas de dilución, de vidrio borosilicato con tapas herméticas. Tubos de fermentación de 18 x 180 mm y 16 x 160 mm Asa de 3 mm de diámetro. Propipeta MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS Caldo Lauril Sulfato Triptosa (LST)doble concentración (10 mL) distribuidos en tubos con tapa caps de 18x180mm o 16x160mm. Caldo Lauril Sulfato Triptosa (LST) concentración simple (10 mL) distribuidos en tubos con tapa caps de 18x180 ó 16x 160mm. Caldo Bilis Verde Brillante 2% (BVB). Caldo EC. Agua peptonada 10 % o agua de dilución buffer fosfato Butterfield’s con MgCl2.

NMP PARA LA DETERMINACION DE COLIFORMESY COLIFORMESFECALES EN AGUAS Sección Microbiología de Alimentos 7. 7.1 DESARROLLO TEST PRESUNTIVO PRT-712.03-005

Fecha emisión: 23-08-2002 Revisión: 5 Fecha revisión: 31-08-2010 Página 3 de 6

En el test Presuntivo se utiliza caldo LST con tubos de fermentación y como diluyente, agua de dilución buffer fosfato Butterfield’s estéril. 7.1.1 7.1.2 7.1.3 7.1.4 7.1.5 7.1.6 7.1.7 7.1.8 Previo a la inoculación, lamuestra y diluciones, deben agitarse vigorosamente 25 veces. Mezclar por agitación suave las porciones de muestra en el medio. Inocular 5 tubos de caldo LST doble concentración con 10 mL de muestra cada tubo. Inocular 5 tubos de caldo LST concentración simple con 1 mL de muestra cada tubo. Transferir 1 mL de muestra a un tubo que contenga 9 mL de diluyente para obtener la dilución 1:10. Inocular...