Resumen tecnicas blot

RESUMEN TÉCNICAS BASADAS EN LA HIBRIDACIÓN: BLOTTING
La técnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la autorradiografía, y permite identificar la presencia de una bandaconcreta en un gel de electroforesis, bien sea de proteínas o de ácidos nucleicos:
Si se trata de proteínas, la técnica se llama Western blot. Se utilizan anticuerpos marcados con radioactividad paraidentificar cuál es la banda que presenta la proteína que me interesa localizar (Gonzales, M. 2006).
Si se trata de DNA, la técnica se llama Southern blot. Se utilizan sondas de DNA (moléculas de DNAmarcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandas del gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda (Gonzales, M. 2006).
Si se trata de RNA, la técnica sellama Northern blot. Se utilizan sondas de RNA (moléculas de RNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandas del gel contienen secuencias complementarias ala de la sond (Gonzales, M. 2006).
Si se utiliza para detectar biomoléculas, y para detectar, analizar, y la identificación de proteínas. la técnica se llama dot blotting Se representa unasimplificación de la transferencia de Northern , Southern blot o Western blot.
Southern blot
El método tipo Southern o Southern blot fue desarrollado por E. M. Southern para la detección de genes específicos en elADN celular. El ADN es digerido con una enzima de restricción y los fragmentos son separados por tamaños mediante una electroforesis en un gel. Se realiza tinción con bromuro de etidio para comprobarla calidad de la electroforesis y del ADN . A continuación los fragmentos de ADN de doble cadena son parcialmente hidrolizados con un ácido débil y desnaturalizados con NaOH para permitir latransferencia. Posteriormente, el ADN es transferido a un filtro de nitrocelulosa, con lo que en el filtro queda representada una réplica de la disposición de los fragmentos de ADN presentes en el gel....