Revision Molecular
Páginas: 8 (1948 palabras)
Publicado: 4 de febrero de 2013
RESUMEN
La secuenciación es la unión de unos métodos con el fin de determinar el orden de una cadena de oligonucleico o proteínas, esta técnica comenzó con el método de secuenciación de Maxam-Gilbert en el que se realizaba una marcación con isotopos radiactivos, pero quedo en desuso y fue reemplazado por el método de Sanger en el que se utilizan los didesoxinucleotidos que fueron modificadosestructuralmente para que no puedan continuar en la elongación, se pueden realizar marcajes con fluorescencia de diferentes colores para determinar la secuenciación.
PALABRAS CLAVE: secuenciación, nucleótidos
ABSTRAC
Sequencing is the union of some methods in order to determine the order of oligonucleico chain or protein, this technique began with the method of Maxam-Gilbert sequencingwhich was performed on a marking with radioactive isotopes, but fell into disuse and was replaced by the Sanger method used in the dideoxynucleotide that were structurally modified so they can not continue in the elongation, markings can be made with different colored fluorescence to determine sequencing.
INTRODUCCION
La secuenciación es un conjunto de métodos cuyo fin es determinar el ordenen el que se encuentran una cadena de oligonucleótidos ó proteínas. El descubrimiento de esta técnica fue de gran ayuda para los científicos, es muy útil en los estudios que se han realizado permitiendo una utilización a gran escala como lo es el proyecto del genoma humano.
Al iniciarse este estudio se pensó que realizar el proceso de secuenciación de miles de millones de nucleótidos era muchomas complicado que la secuenciación de proteínas, actualmente se ha mejorado esta técnica hasta llegar al punto de hacer más fácil la secuenciación nucleotidica que la secuenciación proteica.
SECUENCIACION
En 1977 Holley y sus colaboradores (Stewart y Letham), diseñaron una técnica similar a la que se venia utilizando para la secuenciación de las proteínas, obteniendo como resultado elhallazgo AlaARNt en una levadura. También incorporaron la ribonucleasa T1 (de Aspergillus oryzae).
En el año 1988 Frederick Sanger y sus colaboradores encontraron una manera mas fácil y práctica de fraccionar los oligonucleótidos la cual consistía en la separación por medio de electroforesis en un acetato de celulosa que era seguida por una electroforesis de intercambio iónico en papel.Debido a los cambios que ha tenido esta técnica se han comenzado a emplear enzimas que ayudan a que el proceso de secuenciación sea menos complicado, como se observa en la tabla 1. [1]
Una de las razones para mejorar esta técnica fue el desarrollo del proyecto del genoma humano, que tenia varios objetivos, dentro de los cuales se encontraba la ampliación del conocimiento para continuar con eldesarrollo del genoma humano, también se busca hallar el grado de similitud o diferencia que puede llegar a existir intraespecies e interespecies, pero el objetivo mas importante en este proyecto desde el punto de vista bioquímico analítico, era el desarrollo de nuevas técnicas y formas para la secuenciación debido a que se necesitaban estrategias funcionales por su gran tamaño (miles de millones depares de bases).
El método de Secuenciación de Maxam-Gilbert, se utilizo durante mucho tiempo, se basaba en la modificación química del ADN y posterior escisión en bases específicas, necesita hacerse un marcaje radiactivo en el área específica a secuenciar aunque quedo en desuso por la utilización de materiales altamente tóxicos. Este método fue reemplazado por el método de Sanger o terminaciónde cadena en el que se utiliza didesoxinucleotidos trifosfatos (ddNTPs), que son nucleótidos con un cambio en su estructura (donde debería haber un grupo OH hubo un cambio por un H) al no tener el grupo 3-OH no pueden seguir secuenciando, este método utiliza objetos como lo son una hebra molde de ADN, una enzima ADNpol, Un cebador especifico y los nucleótidos marcados, estos pueden ser marcados...
La secuenciación es la unión de unos métodos con el fin de determinar el orden de una cadena de oligonucleico o proteínas, esta técnica comenzó con el método de secuenciación de Maxam-Gilbert en el que se realizaba una marcación con isotopos radiactivos, pero quedo en desuso y fue reemplazado por el método de Sanger en el que se utilizan los didesoxinucleotidos que fueron modificadosestructuralmente para que no puedan continuar en la elongación, se pueden realizar marcajes con fluorescencia de diferentes colores para determinar la secuenciación.
PALABRAS CLAVE: secuenciación, nucleótidos
ABSTRAC
Sequencing is the union of some methods in order to determine the order of oligonucleico chain or protein, this technique began with the method of Maxam-Gilbert sequencingwhich was performed on a marking with radioactive isotopes, but fell into disuse and was replaced by the Sanger method used in the dideoxynucleotide that were structurally modified so they can not continue in the elongation, markings can be made with different colored fluorescence to determine sequencing.
INTRODUCCION
La secuenciación es un conjunto de métodos cuyo fin es determinar el ordenen el que se encuentran una cadena de oligonucleótidos ó proteínas. El descubrimiento de esta técnica fue de gran ayuda para los científicos, es muy útil en los estudios que se han realizado permitiendo una utilización a gran escala como lo es el proyecto del genoma humano.
Al iniciarse este estudio se pensó que realizar el proceso de secuenciación de miles de millones de nucleótidos era muchomas complicado que la secuenciación de proteínas, actualmente se ha mejorado esta técnica hasta llegar al punto de hacer más fácil la secuenciación nucleotidica que la secuenciación proteica.
SECUENCIACION
En 1977 Holley y sus colaboradores (Stewart y Letham), diseñaron una técnica similar a la que se venia utilizando para la secuenciación de las proteínas, obteniendo como resultado elhallazgo AlaARNt en una levadura. También incorporaron la ribonucleasa T1 (de Aspergillus oryzae).
En el año 1988 Frederick Sanger y sus colaboradores encontraron una manera mas fácil y práctica de fraccionar los oligonucleótidos la cual consistía en la separación por medio de electroforesis en un acetato de celulosa que era seguida por una electroforesis de intercambio iónico en papel.Debido a los cambios que ha tenido esta técnica se han comenzado a emplear enzimas que ayudan a que el proceso de secuenciación sea menos complicado, como se observa en la tabla 1. [1]
Una de las razones para mejorar esta técnica fue el desarrollo del proyecto del genoma humano, que tenia varios objetivos, dentro de los cuales se encontraba la ampliación del conocimiento para continuar con eldesarrollo del genoma humano, también se busca hallar el grado de similitud o diferencia que puede llegar a existir intraespecies e interespecies, pero el objetivo mas importante en este proyecto desde el punto de vista bioquímico analítico, era el desarrollo de nuevas técnicas y formas para la secuenciación debido a que se necesitaban estrategias funcionales por su gran tamaño (miles de millones depares de bases).
El método de Secuenciación de Maxam-Gilbert, se utilizo durante mucho tiempo, se basaba en la modificación química del ADN y posterior escisión en bases específicas, necesita hacerse un marcaje radiactivo en el área específica a secuenciar aunque quedo en desuso por la utilización de materiales altamente tóxicos. Este método fue reemplazado por el método de Sanger o terminaciónde cadena en el que se utiliza didesoxinucleotidos trifosfatos (ddNTPs), que son nucleótidos con un cambio en su estructura (donde debería haber un grupo OH hubo un cambio por un H) al no tener el grupo 3-OH no pueden seguir secuenciando, este método utiliza objetos como lo son una hebra molde de ADN, una enzima ADNpol, Un cebador especifico y los nucleótidos marcados, estos pueden ser marcados...
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