Rubrica2 Parcial_Acidos2015
Páginas: 9 (2055 palabras)
Publicado: 4 de noviembre de 2015
El manual debe contener los siguientes aspectos:
Valor
• Objetivo
---
• Fundamento (Indicar el fundamento de las técnicas, algunos reactivos utilizados ¿por qué se usaron?)
10
• Materiales
-------
• Procedimiento ( hacer uso de esquemas o diagramas)
15
• Resultados (no omitir cantidades o condiciones a las que fue sometida la muestra, anexar imágenes y breve descripción)
15
•Interpretación de resultados (¿resultados negativos o positivos?, ¿qué se observa en los geles?, ¿por qué?, ¿Qué dice la literatura sobre eso?
35
• Ejercicios de consulta: Descripciones breves en lenguaje propio
5
• Conclusión
10
• Bibliografía (Formato APA)
5
TOTAL
100
1. Reacción en Cadena de la polimerasa y electroforesis en gel de agarosa.
En 1983, el bioquímico Karry Mullis desarrolló latécnica de Biología Molecular que desde entonces ha revolucionado la investigación biológica y médica, misma que lo hizo acreedor al premio Novel de Química en 1993. Esta Técnica denominada Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), es usada para replicar enzimáticamente DNA in vitro, permitiendo que una pequeña cantidad de moléculas de DNA molde sean amplificadas de maneraexponencial.
El término electroforesis se refiere a una técnica separativa que emplea un campo eléctrico aplicado que actúa sobre partículas cargadas causando su movimiento a través de una matriz. El primer aparato sofisticado de electroforesis fue desarrollado por Tsiselius en
1937. Su trabajo le valió el premio Nobel en 1948. En 1940 y 1960 sobrevino un desarrollo
deelectroforesis aplicándose a diversas moléculas, desde proteínas hasta aminoácidos e iones orgánicos.
Objetivo:
Conocer y ser capaz de explicar lo principios básicos de la PCR y hacer uso de electroforesis para analizar sus resultados.
Fundamento: (Indicar el fundamento de las técnicas, algunos reactivos utilizados ¿por qué se usaron?)
Reacción en cadena de la polimerasa:
Se basa en larepetición de un ciclo formado por tres etapas:
1ª Desnaturalización del ADN doble cadena
2ª Hibridación de los cebadores a la zona 3´específica de cada una de las hebras
3ª Extensión del cebador por actuación de la DNA polimerasa
En la primera etapa (desnaturalización) la doble hélice de ADN se separa en dos hebras. Para ello se realiza una incubación de la muestra a altas temperaturas (93-97ºC).La renaturalización se producirá cuando la temperatura disminuya.
En el segundo paso (hibridación) los primers se unen a las zonas 3´ complementarias que flanquean el fragmento que queremos amplificar. Se realiza gracias a la baja temperatura (50-65ºC).
En la tercera etapa (elongación) se produce la síntesis de una cadena sencilla (produciéndose un fragmento de doble cadena por lacomplementariedad) en la dirección 5´-> 3´ mediante la enzima DNA polimerasa, la cual incorpora los deoxinucleótidos fosfato presentes en el medio siguiendo la cadena molde.
Diseño de los primers
Para la elección de los primers, existen una serie de normas que nos pueden ayudar, aunque hay que indicar también que existen programas de ordenador que nos facilitan esta tarea (DNAsis, Primer3, etc.).
El contenidoen G + C debe ser aproximadamente del 50%. La relación máxima de purinas/pirimidinas será 60%/40%.
Deben evitarse zonas con largas secuencias de una sola base.
No seleccionar cebadores que en su extremo 3´ tenga una importante estructura secundaria.
Se recomienda que los extremos las últimas bases sean G o C.
Se debe evitar la complementariedad entre la pareja de primers. Si ésta existe entre losextremos 3´, se aumenta la posibilidad de que se creen dímeros de cebadores.
Normalmente deben tener un tamaño de 18-30 pb.
La Tª de hibridación de los cebadores ha de ser similar en ambos y será variable en función de la secuencia de los mismos. Generalmente oscila entre 45 y 65ºC.
Si el primer es menor a 20 pb, la temperatura de fusión (Tm), se calcula en base a la siguiente fórmula:
Tm= 4...
El manual debe contener los siguientes aspectos:
Valor
• Objetivo
---
• Fundamento (Indicar el fundamento de las técnicas, algunos reactivos utilizados ¿por qué se usaron?)
10
• Materiales
-------
• Procedimiento ( hacer uso de esquemas o diagramas)
15
• Resultados (no omitir cantidades o condiciones a las que fue sometida la muestra, anexar imágenes y breve descripción)
15
•Interpretación de resultados (¿resultados negativos o positivos?, ¿qué se observa en los geles?, ¿por qué?, ¿Qué dice la literatura sobre eso?
35
• Ejercicios de consulta: Descripciones breves en lenguaje propio
5
• Conclusión
10
• Bibliografía (Formato APA)
5
TOTAL
100
1. Reacción en Cadena de la polimerasa y electroforesis en gel de agarosa.
En 1983, el bioquímico Karry Mullis desarrolló latécnica de Biología Molecular que desde entonces ha revolucionado la investigación biológica y médica, misma que lo hizo acreedor al premio Novel de Química en 1993. Esta Técnica denominada Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), es usada para replicar enzimáticamente DNA in vitro, permitiendo que una pequeña cantidad de moléculas de DNA molde sean amplificadas de maneraexponencial.
El término electroforesis se refiere a una técnica separativa que emplea un campo eléctrico aplicado que actúa sobre partículas cargadas causando su movimiento a través de una matriz. El primer aparato sofisticado de electroforesis fue desarrollado por Tsiselius en
1937. Su trabajo le valió el premio Nobel en 1948. En 1940 y 1960 sobrevino un desarrollo
deelectroforesis aplicándose a diversas moléculas, desde proteínas hasta aminoácidos e iones orgánicos.
Objetivo:
Conocer y ser capaz de explicar lo principios básicos de la PCR y hacer uso de electroforesis para analizar sus resultados.
Fundamento: (Indicar el fundamento de las técnicas, algunos reactivos utilizados ¿por qué se usaron?)
Reacción en cadena de la polimerasa:
Se basa en larepetición de un ciclo formado por tres etapas:
1ª Desnaturalización del ADN doble cadena
2ª Hibridación de los cebadores a la zona 3´específica de cada una de las hebras
3ª Extensión del cebador por actuación de la DNA polimerasa
En la primera etapa (desnaturalización) la doble hélice de ADN se separa en dos hebras. Para ello se realiza una incubación de la muestra a altas temperaturas (93-97ºC).La renaturalización se producirá cuando la temperatura disminuya.
En el segundo paso (hibridación) los primers se unen a las zonas 3´ complementarias que flanquean el fragmento que queremos amplificar. Se realiza gracias a la baja temperatura (50-65ºC).
En la tercera etapa (elongación) se produce la síntesis de una cadena sencilla (produciéndose un fragmento de doble cadena por lacomplementariedad) en la dirección 5´-> 3´ mediante la enzima DNA polimerasa, la cual incorpora los deoxinucleótidos fosfato presentes en el medio siguiendo la cadena molde.
Diseño de los primers
Para la elección de los primers, existen una serie de normas que nos pueden ayudar, aunque hay que indicar también que existen programas de ordenador que nos facilitan esta tarea (DNAsis, Primer3, etc.).
El contenidoen G + C debe ser aproximadamente del 50%. La relación máxima de purinas/pirimidinas será 60%/40%.
Deben evitarse zonas con largas secuencias de una sola base.
No seleccionar cebadores que en su extremo 3´ tenga una importante estructura secundaria.
Se recomienda que los extremos las últimas bases sean G o C.
Se debe evitar la complementariedad entre la pareja de primers. Si ésta existe entre losextremos 3´, se aumenta la posibilidad de que se creen dímeros de cebadores.
Normalmente deben tener un tamaño de 18-30 pb.
La Tª de hibridación de los cebadores ha de ser similar en ambos y será variable en función de la secuencia de los mismos. Generalmente oscila entre 45 y 65ºC.
Si el primer es menor a 20 pb, la temperatura de fusión (Tm), se calcula en base a la siguiente fórmula:
Tm= 4...
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