Separacion de glucogeno

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El glucógeno es el polisacárido de reserva más importante en las células animales, es un polímero con subunidades de glucosa unidas por enlaces (14) y ramificaciones del tipo (16), con una media de una ramificación cada 8 a 12 residuos. (Lehninger, 2006)

Posee una masa molecular de 105 debido a que se asemeja a la amilopectina pero con un mayor número de ramificaciones. (Lozano, J.A. yCols, 2001)

Este polisacárido es en especial abundante en las células que más lo requieren, como las del hígado y las del músculo estriado. En la célula se encuentra en forma de gránulos citoplásmicos, éstos contienen aproximadamente 120.000 residuos de glucosa, además de las enzimas que encargadas de su síntesis y regulación. (J.J. Hicks, 2000)

El glucógeno muscular es una fuente es unafuente disponible de glucosa para la glucólisis del propio músculo. El glucógeno hepático sirve para el almacenamiento y la exportación de glucosa para conservar la glucosa sanguínea entre las comidas. (Harper, 2001)

Se requieren dos actividades para la biosíntesis del glucógeno, la adición de los residuos glucosilos para formar enlaces (14) por la enzima glucógeno sintasa y la formación deramificaciones (16) por la enzima ramificadota; y para la degradación del mismo se requieren igualmente dos actividades, el desdoblamiento de los residuos (14) de las cadenas rectas por fosforólisis por acción de la enzima glucógeno fosforilasa y la hidrólisis de (16) por la enzima desramificadora. (Robert Roskoski. Jr, 2001)

Los objetivos generales de esta práctica son: 1) Describir unmétodo de extracción de glucógeno a partir de un tejido. 2) Explicar qué sucede durante dicha extracción con las proteínas, lípidos e hidratos de carbono. 3) Cuantificar glucógeno hepático de animales de experimentación. 4) explicar el fundamento de la reacción de Antrona. 5) Comparar los resultados obtenidos en animales de experimentación en ayunas y alimentados. 6) Referir los resultados obtenidos almetabolismo normal y en ayunas de los hidratos de carbono. 7) Describir el papel del glucógeno como reservado energético. 8) Enumerar otros factores que influyen en la glucogenólisis y gluconeogénesis.

RESULTADOS

Luego del aislamiento del glucógeno según el procedimiento descrito en la práctica y su posterior lectura en el fotocolorímetro se obtuvieron los siguientes resultados:

TejidoAbsorbancia
Hepático
(ayunado) Tubo n° 1: 0,116
Tubo n° 2: 0,000
Tubo n° 3: 0,000
Tubo n° 3: 1,131
Hepático
(alimentado) Tubo n° 1: 0,061
Tubo n° 2: 0,559

Para obtener un resultado más veraz y eliminar los errores experimentales, se realizó un promedio de los resultados anteriores, obteniendo:
Absorbancia
Ratón Ayunado 0,312
Ratón Alimentado 0,310



Para el cálculode los mg. de glucosa obtenidos a partir de la absorbancia, es necesario la elaboración de una curva de calibración a partir de los mg. de glucosa presenten en los estándares.

Tubo Estándar [10mg/100ml] H20 (ml) Antrona Absorvancia
1 0,1 0,9 4 ml 0,183
2 0,2 0,8 4 ml 0,266
3 0,4 0,6 4 ml 0,467
4 0,6 0,4 4 ml 0,649
5 0,8 0,2 4 ml 0,998

Para realizar calcular los mg. de glucosa en cadauno de los estándares se realizan las siguientes reglas de tres:


Sabiendo que en 100 ml de solución 10 mg. de glucosa
0,1 ml de solución X
X= 0,01 mg. de glucosa

Sabiendo que en 100ml de solución 10 mg. de glucosa
0,2 ml de solución X
X= 0,02 mg.de glucosa

Sabiendo que en 100 ml de solución 10 mg. de glucosa
0,4 ml de solución X
X= 0,04 mg. de glucosa

Sabiendo que en 100 ml de solución 10 mg. de glucosa
0,6 ml de solución X
X= 0,06 mg. de glucosa

Sabiendo que en 100ml de...
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