Separacion en columna

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SEPARACIÓN EN COLUMNA
* TÉCNICAS DE SEPARACIÓN D E PROTEÍNAS

FILTRACIÓN EN GEL
* Partículas de Sephadex o agarosa, se evalúan de acuerdo con los tamaños de los poros, que a su vezdeterminan qué tamaños moleculares pasan a través del interior de cada bola o partícula de la columna.
* Moléculas grandes: Fluyen a través de los intersticios y emergen primero del fondo de lacolumna.
* Moléculas ligeramente menores: Penetran los poros más grandes quedando retardadas a su paso a través de la columna.
* Moléculas pequeñas: Penetran en los poros de menor tamaño y sonretenidas por más tiempo.
* Partículas de sal: Penetran el interior de los poros de filtración de gel y aparecen después que todas las proteínas hayan emergido.

* El orden de la eluciónproteica está en función del peso molecular o del tamaño, apareciendo en primer lugar las de mayor tamaño y en último lugar las más pequeñas.
* Requiere que el medio sea inerte y no interactúe,químicamente o por carga, con las proteínas.

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
* Tiene la ventaja de que la carga de las proteínas hace que se fijen a las partículas de un medio de soportecargado como el DEAE o el QAE.

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO ANIÓNICO
* Las proteínas suelen aplicarse a un pH básico del orden de 8.6, en el cual están cargadas negativamente (albúmina y globulinasα-1, α-2 y β son aniones) o no presentan carga neta (γ-globulinas).
* Las proteínas neutras pasan a través de la columna de intercambio aniónico, mientras que las aniónicas se fijan a la matriz dela columna cargada positivamente.
* Mediante la utilización de un gradiente uniformemente creciente de concentración salina en el tampón eluyente, las proteínas pueden separarse de acuerdo con sucarga.
* Aquellas que presentan una menor carga eluirán en primer lugar, mientras que las que tengan la mayor carga (como la albúmina) sólo se eluirán cuando sean desplazadas por niveles...