Tecnicas generales de aislamiento, separacion y purificacion (cromatografia en capa fina y en columna)

OBJETIVOS

✓ Extraer los compuestos de una mezcla vegetal (pimentón rojo).

✓ Utilizar la cromatografía en capa fina para la separación de los componentes de una mezcla.

✓ Calcular los valores de Rf de las sustancias separadas.

✓ Deducir a través del Rf, la relación que existe entre la polaridad de las sustancias que se analizan y la de la fase móvil empleada.

✓Separar las fracciones coloreadas por medio de cromatografía en columna.

TEORIA RELACIONADA

Aspectos generales de la cromatografía.

Cromatografía: CHROMA: Color y GRAPHEIN: Escribir.

Historia.

Mikhail Tswett separó pigmentos vegetales (clorofilas y xantofilas) haciendo pasar disoluciones de estos compuestos a través de una columna de vidrio rellena con carbonato de calcio finamenteseparados apareciendo entonces las especies separadas como bandas coloreadas.

La cromatografía: conjunto de diversos métodos que permiten separar componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas. La muestra se disuelve en una fase móvil y se hace pasar a través de una mezcla estacionaria inmiscible, la cual se mantiene fija en una columna o sobre una superficie solida.Consideraciones:

➢ fases: se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de forma diferente. (polaridad).

➢ Analitos: retenidos con fuerza por la fase estacionaria, se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil.

Unión débil a fase estacionaria, se mueve con rapidez

➢ Diferente movilidad: separación de los componentes de la muestra en bandas que puedenanalizarse cualitativa y cuantitativamente.

TIPOS DE CROMATOGRAFIA

Gas-solido
Cromatografía gaseosa
Gas-líquido

Cromatografía de columna

Cromatografía liquida de alta resolución.Cromatografía en capa fina

Liquido-Liquido

Liquido-Solido

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA.

Tanto los extractos de productos naturales, como los crudos de las reacciones orgánicas, suelen ser mezclas multicomponentes, a menudo muy compleja. Este hecho constituyo un serioimpedimento para el estudio de los unos y de los otros, por parte de los químicos, ya que era una técnica monótona, aburrida y lenta, hasta la implantación de los modernos métodos separativos. Entre estos, uno de los que mayor relevancia ha alcanzado, es la cromatografía de adsorción en columna.

TECNICA CONVENCIONAL.

La cromatografía en columna utiliza una fase estacionaria (inmóvil) y otra móvil.La primera es un sólido introducido en un tubo de vidrio situado verticalmente, la segunda es un disolvente o mezcla de disolventes, también llamadas eluente o eluyente.
Una solución conteniendo la mezcla de sustancias a separar, se deja pasar por la columna, con lo que los diferentes componentes quedan retenidos en la misma mas o menos fuertemente según sus características y las propiedades más omenos adsorbentes de la fase estacionaria, de este modo, haciendo percolar la fase móvil idónea, las diferentes sustancias atraviesan la columna a distinta velocidad, siendo fraccionadas a su salida.
ELECCION DEL ADSORBENTE Y ELUYENTE

Los adsorbentes de uso más universal son, en primer lugar, el gel de sílice o silica gel, y a continuación la alúmina neutra. La silica gel es adecuada para laseparación de la mayoría de sustancias, o para el fraccionamiento de mezclas complejas en grupos de sustancias, pero dado que la superficie de esta adsorbente es ligeramente acida, no es adecuada para la separación de sustancias fuertemente básicas pues queda irreversiblemente ligada. Otra adsorbentes como las alúminas acidas y básicas, florisil, carbón activo, así como adsorbentes modificados...