separación de aminoácidos por cromatografía de capa fina

SEPARACION DE AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA
KEYWORDS: Cromatografía en capa fina, coeficiente de reparto, reacciones coloreadas.
RESUMEN: En esta práctica se llevara a cabo la separación de algunos aminoácidos, por el método de cromatografía en capa fina, en la que los componentes de una mezcla de aminoácidos se separan por diferencia de solubilidad entre dos sistemas disolventes,es una técnica simple y de fácil desarrollo, el parámetro experimental asociado a la técnica es el Rf (coeficiente de reparto), relacionado con la solubilidad relativa de un compuesto entre la fase estacionaria y fase móvil, que se revelarán e identificarán mediante la reacción con la Ninhidrina. Se tienen 5 aminoácidos conocidos (patrones) y una muestra problema la cual identificaremos porcomparación de los coeficientes de reparto con estos patrones.
ABSTRACT: In this practice there was carried out the separation of some amino acids, for the method of thin layer chromatography, In that the components of a mixture(mixing) of amino acids separate for difference of solubility between two solvent systems, it is a simple technology(skill) and of easy development, The experimental parameterassociated with the technology(skill) is the Rf (coefficient of distribution), related to the relative solubility of a compound between the stationary phase and mobile phase, which will reveal and identify by means of the reaction by the Ninhidrina.
There are had 5 known Amino acids (bosses) and one shows problem, we will identify for comparison of the coefficients of distribution with thesebosses.
RESULTADOS:
Utilizamos una pecera de vidrio la cual llenamos con 0,5 cm de altura del eluyente (etanol 96 % : hidróxido de amonio 34%, en proporción 7:3 ), tapamos de inmediato con papel vinipel para la saturación.
Utilizamos una cromatoplaca de 10 x 6,6 cm trazamos con un lápiz 6 líneas paralelas a uno de los bordes y a una distancia de 2 cm, se rotula para indicar el aminoácido que se va asembrar en cada línea.
Figura 1: cromatoplaca rotulada.
Formulas de los aminoácidos empleados:
1. GLICINA:
2. L- LISINA:
3. ASPARAGINA:
4. L- FENILALANINA:
5. D-L TREONINA:
6. MUESTRA PROBLEMA
Con los capilares construimos micro pipetas y con ellas aplicamos 4 gotas de la solución de cada muestra sobre las líneas de la cromatoplaca, a intervalos de tiempo, se secó la placa con ayuda deun secador, y luego la colocamos en la cámara cromatografica (pecera) de forma vertical, y se procedió a tapar la cámara y esperar hasta que el eluyente subiera por capilaridad hasta 2 cm antes del borde superior.
Figura 2: Cromatoplaca dentro de la cámara cromatografica.
Al cabo de 1 hora la cromatografía termina, sacamos la placa y tomamos la medida de la distancia recorrida por el eluyente,esta corresponde al frente del disolvente (7,1 cm) y la secamos con el secador.
Figura 3: cromatoplaca terminada la cromatografía
El siguiente paso fue el revelado con la solución de ninhidrina, se rociaron todas las cromatoplacas y se dejo secar.
Figura 4: Cromatoplaca después del revelado.
Con una regla se toman las distancias desde el punto de aplicación al centro de la mancha, paradeterminar los coeficientes de reparto.
Rf = Distancia desde el punto de aplicación al centro de la mancha
Distancia desde el punto de aplicación al frente de disolvente
Frente del disolvente: 7.1 cm
AMINOACIDO
DISTANCIA RECORRIDA (cm)
Rf
Glicina
4.5
0.63
L-Lisina
1.7
0.23
Asparagina
5
0.70
L-Fenilalanina
6.2
0.87
D-L treonina
5.8
0.81
Figura 5: Cromatoplaca después del revelado delotro grupo.
Tabla 1: distancia recorrida por cada uno de los aminoácidos y cálculo del Rf.
La muestra problema no pudo ser determinada ya que se reveló mal la cromatoplaca, la Ninhidrina no tiño esta parte entonces no coloreó la distancia recorrida por esta, evitando la identificación de los aminoácidos por comparación con los patrones. Por esta razón se han tomado los valores de otro grupo...