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Reporte de Enzimas
Laboratorio Bioquímica N°4
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PARTE 1
Objetivo: determinar el pH óptimo de la enzima fosfatasa ácida de aorta de bovino.
Siguiendolos pasos indicados en la guía de laboratorio y lo que se indica en la tabla 1, Ud. podrá
determinar el pH óptimo donde la enzima presenta la mayor actividad enzimática.
Tabla 1. Protocolo para lapreparación de soluciones con distintos valores de pH.
Volumen (mL)

buffer citrato

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

1,0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

0.5

0.5

0.50.5

0.5

0.5

0.5

0

0

2.5

2.5

2.5

2.5

2.5

(pH 3.0)

MgCl2

Tubo

B
p-nitrofenilfosfato

Tubo

C

-

(pH 4.5)

(pH 5.6)

(pH 7.5)

(pH 9.0)

H2O4.5

4.5

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

Enzima

1.0

0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

Rotule los tubos de ensayo según corresponda y proceda a incubar a 37°C por el tiempo quele indiquen
los profesores de laboratorio. Detenga la reacción y mida absorbancia como lo indica la guía de laboratorio.
Para cada tubo debe agregar la enzima al final, luego de mezclar todos losreactivos. Explique el porqué de
este paso (1 punto).

Luego de la preparación de los distintos tubos con diferentes valores de pH proceda a determinar la
absorbancia para cada uno de ellos como selo indicará su profesor de laboratorio y anote este valor en la
tabla 2.
Para ello Ud. debe saber que la concentración de producto formado por una enzima se calcula con la
fórmula: C= ABS/ ε L.Donde ε=17500 M-1 cm-1, L= 1 cm.

Recuerde que en esta actividad práctica la enzima fosfatasa ácida forma el producto llamado p-nitrofenol.
Y la velocidad de reacción de una enzima se calcula con lafórmula: velocidad = [p-nitrifenol] / Δt. Donde
Δt es el tiempo de incubación.
Tabla 2. Valores de absorbancia, concentración de producto formado y velocidad de reacción de la enzima
fosfatasa...