Técnica Histológica

Técnica Histológica 
Es un conjunto de pasos a seguir para la obtención de preparados histológicos aptos  para su estudio mediante el microscopio óptico. 

1­ Obtención del material:  se efectúa mediante biopsia, necropsia o autopsia.
·  Biopsia:   consiste  en  tomar  un  trozo  de  tejido  de  un  ser  vivo.  Este  procedimiento  de  uso  frecuente  en  medicina  requiere  el  mismo cuidado  de asepsia, antisepsia, etc., que se utiliza en todo acto quirúrgico menor o  mayor. ·  Necropsia:   es  el  procedimiento  en  el  cual  se  extrae  material  de  un  cadáver ·  Autopsia:  consiste  en  el  estudio  analítico  y  sistemático  completo.  macroscópico  y  microscópico  de  los  órganos,  aparatos  y  sistemas  de  un cadáver. Se realiza para establecer causas de muerte. 

2­ Fijación:   una  vez  obtenido  el  material  que  se  desea  estudiar  por  cualquiera  de 
los  procedimientos  descriptos  se  procede  a  su  fijación  con  lo  que  se  evita  la  destrucción o  lisis celular. Es un proceso físico  — químico complejo por el cual  se  mantiene  a  las  estructuras  orgánicas  en  el  estado  más  parecido  al  que  poseían  en  vida. Los objetos de la fijación son: ·  Mantener las estructuras en el estado más parecido al que poseían in vivo. ·  Evitar la lisis celular y la proliferación bacteriana  ­  ­ ·  Dar  cierta  solidez  o  dureza  al  tejido  o  material.  La  fijación  detiene  los  procesos  vitales  pero  en  ciertas  condiciones  mantiene  las  actividades  de  algunos  componentes  moleculares,  por  ejemplo  la  actividad  de algunas  enzimas 

Tipos de fijadores 

•  Físicos:  Por ebullición. Por congelación: bajas temperaturas de –190ºC a  ­70ºC (Nitrógeno liquido. dióxido de carbono) permiten excelentes fijaciones.  •  Químicos:   se usan soluciones simples como alcoholes (etanol o metanol que  pueden fijar células en extendidos) y cl formol al 10%. El formol es una solución de aldehído fórmico al 40% en agua destilada. De esta solución se toman 10 ml y  se  le agregan 10  ml de agua destilada (10%). Esta es  la  solución  más usada. Se  puede  agregar  a  esta  acetato  de  calcio,  el  que  evita  la  oxidación  del  aldehído  fórmico o ácido fórmico, el que perjudica la fijación. El formol puede disolverse  al 10% en buffer de fosfato en lugar de agua destilada para mantener el pH a 7.4.Cátedra de Biología I – Bioingeniería – Facultad de Ingeniería – U.N.S.J.  1 

•  Mezclas  fijadoras.  se  usan  diferentes  fijadores  en  una  sola  mezcla  para  facilitar la fijación de ciertas estructuras. Ej.: líquidos de Bouin, Zenker. etc.  •  Relación  del  volumen  del  tejido  a  fijarse  con  el  volumen  del  fijador :  es necesario que los trozos a fijar sean de un espesor no mayor de 0.5 mm. Para una  buena  fijación  es  necesario  que  la  relación  volumen  del  tejido  ­  volumen  del  fijador sea de 1/40.  •  Tiempos  de  fijación:  depende  del  tejido,  su  volumen  y  el  fijador  usado  Cuando se usa el formol las piezas pequeñas requieren algunas horas y ya a las 24  horas se fijan bien. La fijación se puede controlar a simple vista por el cambio de  color  del  tejido  y  su consistencia  (se  endurece)  pero  una  buena  fijación  solo  se  aprecia en el corte ya preparado observando al microscopio óptico.  •  Lavado:  después  de  la  fijación  el  tejido  debe  ser  convenientemente  lavado  con agua o bien con otras sustancias que eliminan restos de fijadores especiales 

3­ Deshidratación:  se coloca la muestra en alcoholes de concentración creciente para eliminar el agua que contenga ya que la parafina no es miscible con agua. Se utiliza  etanol 70%, 80%, 96% y 100%. 

4­  Aclaración:   son  solventes  que  producen  transparencia  en  los  tejidos,  además  de 
solubilizar  la parafina. Entre ellos se encuentran.  xilol. toluol. acetona, benceno. El  más usado es el Xilol. 

5­ Inclusión en parafina:...