TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN DE ADN

Revista Agraria -Nueva Epoca- Año XVII · Vol. 52 · No 1 · Mayo - Agosto 2004

Comparación de Tres Métodos para el Aislamiento
de ADN en Girasol
Francisco Castillo Reyes
UAAAN, Depto. de Fitomejoramiento. Estudiante de maestría
Alma Patricia García Villanueva y Martha Gómez Martínez
UAAAN, Departamento de Fitomejoramiento, Técnicos académicos
M. Humberto Reyes Valdés
UAAAN, Departamentode Fitomejoramiento
Abstract. Comparison of three methods for DNA isolation in sunflower. To obtain good quality DNA in a
given species testing of different isolation methods is often required. Three methods of DNA isolation
were tested in sunflower, and evaluated according to the concentration, purity and electrophoretic
behavior of Puregene® DNA purification kit (Gentre systems), Doyle andDoyle (1990) and Graham et
al. (1994). Two of those methods were acceptable for DNA isolation in terms of absorbance ratio,
concentration and electrophoretic aspect. The method of Doyle and Doyle (1990) was selected for
having a lower cost.
Key words: sunflower, DNA.
Resumen. Para obtener ADN de buena calidad en una especie en particular, frecuentemente se requiere del
ensayo de diferentesmétodos de aislamiento. Se compararon tres métodos de aislamiento de ADN en girasol en
términos de su concentración, pureza y comportamiento electroforetico: Puregene® DNA purification kit (Gentre
systems), Doyle y Doyle (1990) y Graham et al. (1994). Dos de estos métodos resultaron aceptables para
aislamiento de ADN en términos de razón de absorbancia, concentración y aspecto electroforético. Seseleccionó
el método Doyle y Doyle (1990) por tener un menor costo

Palabras clave: girasol, ADN.

Introducción
La mayoría de los métodos en genómica requieren del
aislamiento del ADN puro y de alto peso molecular. La
extracción del ADN no es siempre simple y los protocolos
publicados no son necesariamente reproducibles para
cualquier especie, debido a que un gran número de plantasproducen metabolitos secundarios tales como alcaloides,
flavonoides, fenoles, polisacáridos, terpenos, quininas y
nucleasas que dificultan su aislamiento (Khanuja, et al.,
1999; Fellers, et al., 2002; Chen y Ronald, 1999).
La literatura exhibe un gran número de procedimientos,
muchos de los cuales son variantes de los métodos
generales. El contar con un protocolo de extracción de
ADN esimportante especialmente cuando se trabajan
con especies donde el protocolo de extracción específico
no se ha establecido; tal es el caso del girasol (Helianthus
annuus L.).

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En general los métodos para extracción de ADN
encontrados en la literatura buscan rapidez, calidad y
economía, para que el producto se pueda utilizar con
diferentes objetivos. Los métodos que se usan para extraer
ADNse valen de diferentes agentes con actividad
enzimática, proteica y detergentes como el ácido etilendiamino-tetracético (EDTA), EGTA y la fenentrolina; la
proteinasa K; el duodecil sulfato de sodio (SDS); el
bromuro de hexadeciltrimetilamonio (CTAB) y el Tween
a concentraciones diversas, según la especie que se
analice.
Dentro de los métodos basados en el bromuro de
hexadeciltrimetilamonio(CTAB), el cual se adiere
fuertemente al ADN, desplaza las proteínas y previene la
degradación, se encuentra el de Doyle y Doyle (1990)
que consiste en la extracción con una solución con CTAB
y mercaptoetanol, en la remoción del CTAB con
cloroformo-alcohol isoamílico y en la precipitación con

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isopropanol; el de Graham et al. (1994)en el que durante
el proceso de extracción se usa albúmina sérica bovina en
lugar de marcaptoetanol, y durante el de precipitación,
etanol en lugar de isopropanol, además de que se le añade
acetato de amonio.
Los métodos como el Edwards et al. (1991), Cheung
et al. (1993) y Orad y Dronovalli (1992) utilizan dodecil
sulfato de sodio (SDS), sarcosilato y mecaptoetanol,
respectivamente,...