Tecnicas histologicas

TECNICAS HISTOLOGICAS
DEFINICION: Es el conjunto de operaciones que se somete un material organizado para hacer posible su estudio por medio del microscopio, posibilitando la observación de las estructuras no visibles al ojo humano.


TECNICAS HISTOLOGICAS

1. Obtención del material histológico
Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas:
 Biopsia: Unabiopsia es un procedimiento diagnóstico que consiste en la extracción de una muestra total o parcial de tejido para examinarla al microscopio. La palabra biopsia es compuesta y procede del griego bio, vida, y opsia, ver.
 Necropsia (llamada vulgarmente autopsia): Es el procedimiento técnico y científico, por el cual se estudia, un cadáver humano o animal, para tratar de identificar posible causade muerte, así como la identificación del cadáver, se diferencia de la necrocirugía (antiguamente llamada autopsia), por el hecho que en este procedimiento no se toca ningún órgano interior ni se disecciona el cadáver. La palabra necropsia proviene de las voces griegas νεκρóς /nekrós/ 'cadáver' y ὂψις /òpsis/ 'observar', que significa 'observar un cadáver'.

2. Fijación
En este paso el tejidoobtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem. Unos de los fijadores más usado es el formol al 10% (formaldehido). En el caso de que utilicemos más adelante el microscopio electrónico, usaremos glutaraldehído (para proteínas) uosmio (para lípidos). Fijación: Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas, de manera que mantenemos lascélulas con las propiedades intactas lo mejor posible. Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciarían la autolisis y llevarían a la DEGENERACIÓN POST MORTEM. La fijación mantiene las estructuras al estimular la formación de enlaces cruzados entre las proteínas.



3. Lavados
Se debe lavar el tejido para quitar el exceso de fijador. Se hace para eliminar elexceso de fijador, de manera que podamos luego hacer la inclusión sin interferencia por parte del fijador. Existen medios de inclusión que son hidrófobos y precisan de la eliminación de agua en la muestra. Tenemos pues que hacer una deshidratación. Debido a que una gran parte del tejido está constituido por agua, se aplica una serie gradual de soluciones acuosas de menor a mayor grado de agentedeshidratante
4. Deshidratación
Suena incoherente que se deba lavar el tejido y después deshidratarlo. El exceso de fijador al momento de la infiltración, incluso en la microtomía, podría afectar los cortes histológicos, y por ello se debe lavar. La deshidratación se hace empleando diferentes soluciones de alcohol de concentración creciente.

5. Aclaramiento
En este paso se sustituye el alcoholpor un disolvente de parafina. El más usado es el xilol(xileno) ya que como la muestra está deshidratada, el xilol entrará hasta lo más profundo del tejido. También el tejido pierde color y adquiere un tono acaramelado.

6. Infiltración
En este paso la muestra se coloca en parafina líquida, cabe mencionar que se debe usar parafina histológica. Como se ha dicho en el paso anterior el tejido estácompletamente lleno de xilol, ahora debido a ósmosis sale el xilol y entra la parafina.
La deshidratación, aclaramiento e infiltración pueden ser realizadas manualmente pero hoy en día se realizan de modo automático en máquinas específicas.

7. Inclusión
Aquí se forman bloques de parafina dentro de los cuales están las muestras a estudiar. También hay maquinas especializadas para la inclusiónen parafina de tejidos. Después de su inclusión y posterior secado, estos se deben poner a enfriar en un congelador para su posterior corte.
8. Microtomía
Se realizan cortes histológicos muy delgados según lo requerido o la costumbre del laboratorio donde se realice la técnica. Los cortes van desde 0,5 micras hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al baño de flotación y se ´pescan´ con un...