Tecnico Laboratorista Quimico

PRÁCTICA # 1
TÉCNICA HISTOLÓGICA
E s una serie de procesos mediante el cual se prepara un tejido para su observación en el microscopio, generalmente se fundamenta en el uso del microscopio óptico y para la interpretación más detallada de la microanatomía se fundamenta en la microscopia electrónica(ME), microscopio electrónico de transmisión(MET) y el microscopio electrónico de barrido(MEB).PREPARACIÓN DE UN TEJIDO
1. TOMA DE LA MUESTRA: Obtenido mediante la técnica de biopsia , necropsia en el cual es conveniente extirpar gran cantidad de tejido sano y lesionado con el fin de contrastar.
2. FIJACIÓN: Técnica usada para la conservación de muestras que se obtiene mediante el empleo de ciertas sustancias químicas individuales o las mezclas de estas. Tiene la función deconservar la estructura del tejido para permitir su tratamiento ulterior las cuales una vez extraídas se colocan inmediatamente en un fijador.
Dentro de sus usos se encuentran:
* Abolir el metabolismo celular
* Impedir la degradación enzimática de células y tejidos destruidos por autolisis
* Destruir los microorganismos patógenos como bacterias hongos ,virus y bacterias
* Endurecer eltejido
El fijador de uso muy común es el FORMOL o también conocido como FORMALINA que es una solución acuosa de formaldehido al 37% que se encarga de preservar la estructura general de la célula y los componentes extracelulares, además no altera de forma significativa a la estructura tridimensional ya que las proteínas mantienen su capacidad de reaccionar con los anticuerpos específicos perosin embargo no reacciona con los lípidos y por tanto es un mal fijador de las membranas.
3. LAVADO Y DESHIDRATACIÓN DE LA MUESTRA: Mediante el uso de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta alcanzar alcohol al 100%.
4. ACLARADO: Para este paso se usan solventes orgánicos como el tolueno y el xileno que son miscibles en alcohol y en parafina para extraer el alcohol al 100%antes de su infiltración de la muestra con parafina fundida.
5. INCLUSIÓN EN PARAFINA : Un a vez que la parafina fundida se haya enfriado y endurecido se empareja para formar un bloque de tamaño adecuado el cual se coloca después en una cortadora especial llamada micrótomo (Aparato que permite realizar cortes muy finos sobre tejidos previamente endurecidos por congelación o por su inclusión enparafina o celoidina) que corta a la muestra en rebanadas finas con una cuchilla de acero y con ello la obtención de cortes muy delgados típicamente de 5 a 15 Mm.
Dentro de esta técnica se pierden estructuras tales como metabolitos intermedios, glucosa, sodio, cloro y sustancias similares que aunque no constituyen elementos hísticos pero participan en procesos de síntesis o reacciones celulares, además apotan información valiosa acerca el metabolismo, transporte activo y procesos vitales de las células .
6. SE MONTAN LOS CORTES EN UN SOBREPORTAOBJETOS DE VIDRIOAL CUAL ANTERIORMENTE SE LE HABRÁ COLOCADO UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE ALBÚMINA
PARA QUE SIRVA DE ADHESIVO.
7. TINCIÓN: Debido a que los cortes en parafina son incoloros la muestra aún no esta alista para su observaciónbajo el microscopio óptico y para ello se debe colorear o teñirse pero para ello la parafina debe disolverse y extraerse de nuevo con xileno de nuevo con xileno o tolueno y los tejidos deben rehidratarse mediante el uso de una serie de alcoholes de concentración decreciente.
El tejido colocado sobre el portaobjetos se tiñe con hematoxilina en agua.
Pero como el contraste EOSINA es más soluble enalcohol se vuelve a deshidratar la muestra en soluciones alcohólicas de concentración creciente y después se tiñe con eosina en alcohol.
8. DESPUÉS DE L COLORACIÓN DE HACE PASAR POR XILENO O TOLUENO Y SE COLOCA POR MEDIO DE UN MONTAJE NO ACUOSO
9. CUBRIR CON UN PORTAOBJETOS
10. SE OBTIENE UN PREPARADO PERMANENTE
OTROS FIJADORES
Debido a que la formalina no preserva todos los...