Tecnología Del Cultivo In Vitro Para Su Aplicación Biotecnológica

Tema 3. Tecnología del cultivo in vitro para su aplicación biológica

Esta capacidad de regenerar plantas en el laboratorio se basa en la capacidad que tienen las plantas de reproducirse asexualmente. Es una herramienta muy útil para la mejora de especies.

Aplicaciones

Permite la multiplicación de plantas en espacio y tiempo reducido, por ejemplo, cuando tenemos que repoblar determinadaszonas. Otras de las aplicaciones es la mejora fitosanitaria y la mejora genética: obtención y multiplicación de plantas transgénicas, obtención de híbrido somáticos, obtención de líneas puras homocigóticas.

Se basa en dos conceptos básicos:

-Totipotencia: capacidad de una célula de manifestar todo el genoma en un momento determinado, dando origen a cualquier otro tipo celular o tisular de unórgano o individuo.

-Plasticidad: capacidad de adaptación reversible que tiene las plantas, consiguiendo así soportar condiciones ambientales extremas y evitar predación, alterando su metabolismo, crecimiento y desarrollo para adaptarse mejor.

Cultivo in vitro

Conjunto de técnicas que permiten el cultivo de célula y tejido en condiciones axénicas (estéril, libre de contaminación) y elaprovechamiento de su totipotencia, así como de su capacidad para variación y modificación genética. Se basa en la multiplicación y neoformación. Por ello, tendremos que controlar los factores que determinan el crecimiento y el desarrollo vegetal.

Los requerimientos serán, un medio de crecimiento y desarrollo, factores físicos: temperatura, luz, agua aire. En un ambiente en el que no haya ningúnorganismo vivo (recipiente)

Aplicaciones en la mejora vegetal

Obtención de plantas transgénicas y con variantes somaclonales. Para la conservación de germoplasma (Tian Arum, tiene una flor gigante, y no existe ya en naturaleza), rescate de embriones de cruces interespecíficos, obtención de híbridos somáticos…

Laboratorio de cultivo in vitro

Se emplean campanas de flujo laminar paramantener las condiciones asépticas, autoclave, cámara de cultivo, estufas de secado de material, material de plástico estéril, pinzas, material de vidrio resistente a altas temperaturas, filtros de esterilización.

Las campanas de flujo laminar pueden ser horizontales o verticales, caracterizándose todas por poseer un filtro a través del cual el aire está libre de contaminación. El interior de lacabina tiene presión positivo, por lo que no penetra el aire contaminado del laboratorio.

Las cámaras de cultivo tienen que tener un control de temperatura, de iluminación y fotoperiodo y en algunos casos de humedad del aire y composición. Las unidades de luz se pueden disponer en cámaras horizontales o verticales.

Pueden utilizarse lámparas incandescentes o fluorescentes, emitiendo lassegundas menos calor que las primeras.

Asepsia

Cuando introducimos una planta en el laboratorio, deja de ser autótrofo, por lo que tendremos que añadirle una fuente de C. Si añadimos azúcar, será muy fácil que aparezcan bacterias, que como tienen un ciclo de desarrollo muy sencillo, se dará una competencia que pondrá en desventaja a la planta. Por ello, será necesario eliminar cualquier tipo decontaminante.

Los tipos de contaminantes que podemos encontrarnos en un cultivo in vitro son muy variados

Bacterias: Pseudomonas, Xanthomonas, Enterobacter, Agrobacterium, bacillus

Hongos: Penicillium, cladosporium, neurospora

-Virus: son menos frecuente, y además no suelen producir alteraciones visuales. TMV

-Trips (insectos que afectan a la zona radicular), nemátodos (patógenossubterráneos, difíciles de ver), áfidos, ácaros

Todo esto hace necesario mantener un cuidado y una limpieza extrema, mucho escrúpulo, y ninguna prisa.

Esterilazción de recipientes, materia y cámaras.

-agentes esterilizamtes:

Antisépticos

Desinfectantes y/o esterilizantes

- esterilización por calor: seco, estufa 160-180 grados y un mínimo de 1 hora. Calor húmedo: autoclave:para...