Tegnologia

CROMATOGRAFIA LIQUIDA
INTRODUCCION
La Cromatografía líquida, también conocida como Cromatografía de líquidos, es una técnica de separación y no debe confundirse con una técnica cuantitativa o cualitativa de análisis. Es una de las técnicas analíticas ampliamente utilizadas, la cual permite separar físicamente los distintos componentes de una solución por la absorción selectiva de losconstituyentes de una mezcla.
En toda cromatografía existe un contacto entre dos fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria, y una móvil (fase móvil) que fluye permanente durante el análisis, y que en este caso es un líquido o mezcla de varios líquidos. La fase estacionaria por su parte puede ser alúmina, sílice o resinas de intercambio iónico que se encuentran disponibles en el mercado. Losintercambiadores iónicos son matrices sólidas que contienen sitios activos (también llamados grupos iogénicos) con carga electrostática (positiva o negativa). De esta forma, la muestra queda retenida sobre el soporte sólido por afinidad electrostática. Dependiendo de la relación carga/tamaño unos constituyentes de la mezcla serán retenidos con mayor fuerza sobre el soporte sólido que otros, lo queprovocará su separación. Las sustancias que permanecen más tiempo libre en la fase móvil, avanzan más rápidamente con el fluir de la misma y las que quedan más unidas a la fase estacionaria o retenidas avanzan menos y por tanto tardarán más en salir o fluir. Éste es el principio fundamental de la cromatografía. Un ejemplo notable es la cromatografía de intercambio iónico. Las columnas más utilizadasson las de sílice.
Métodos de cromatografía líquida
Método | Abreviatura | Mecanismo predominante |
Líquido, sólido o de adsorción | LSC | Adsorción sobre la superficie |
Líquido | LLC | Reparto entre fases líquidas, una móvil y la otra estacionaria. |
Fase enlazada | BPC | Reparto y / o adsorción entre las fases móvil y enlazada. |
Pares de iones | IPC | Separación de pares de ionesentre las fases móvil y enlazada. |
Intercambio iónico | IEC | Uso de la carga por adsorción sobre un sitio iónico fijo por medio de intercambio de cationes o de aniones. |
Exclusión estérica | EC | Aprovechamiento del tamaño de las moléculas por su difusión dentro de poros de tamaño adecuado. |
Afinidad | -- | Uso de la estructura de ligantes inmovilizados para unir bio selectivamente laproteína deseada. |
Selección de un método de cromatografía líquida
El conocimiento de la estructura molecular de los componentes de la muestra puede ser muy útil en la selección de un método de cromatografía líquida. Una guía muy general para la selección de un método se da a continuación.
La cromatografía de adsorción opera mejor en la separación por clases de compuestos o para la separación decompuestos isoméricos. La técnica de cromatografía líquido – líquido es mejor para la separación de homólogos.
Los grupos funcionales que son capaces de formar enlaces de hidrógeno fuertes se retienen mucho en cromatografía de adsorción, sin embargo la CLL(Líquido – líquido) proporciona una alternativa para la separación de estos compuestos, estas serán las muestras que tienen polaridad media yson solubles en disoluciones orgánicas débilmente polares, en general en CLL se logra emparejando la polaridad de la fase estacionaria con la de la muestra y utilizando una fase móvil con una polaridad marcadamente diferente.
La más utilizada es la de fase enlazada, BPC, Reparto y/o adsorción entre las fases móvil y enlazada, y en especial la fase reversa (especialmente la C18) pues permiteseparar tanto compuestos con cierta polaridad como compuestos iónicos mediante el uso de la técnica de supresión de la ionización o de la cromatografía de par iónico dependiendo del pH de máxima estabilidad de la columna.
Los grupos iónicos y los ionizables sugieren el uso de la cromatografía de intercambio iónico o de pares de iones cuando la muestra es soluble en agua y los pesos moleculares son...