Tinción de giemsa

TINCIÓN GIEMSA.
Las tinciones hematológicas tipo Romanowsky utilizan azul de metileno y sus productos de oxidación (azur A, azur B y azur C) como colorantes básicos, combinándolos con la eosina comocolorante ácido.
De este modo, obtenemos una tinción diferencial, es decir, una tinción que es capaz de discriminar entre las distintas estructuras celulares según se tiñan éstas con el coloranteácido, con el básico o con la mezcla de ambos.
Según la proporción de azul de metileno y de eosina que compongan el colorante tendremos distintos métodos de tinción. Entre ellos, los más conocidos sonel método de Giemsa, el de Wright, el de Leishman y el pan óptico de Pappenheim.
Metódica
Es un extracto de las técnicas de tinción hematológicas de la casa Panreac.
Fundamento
Utilizamos comocolorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa.
Material necesario
* Microscopio óptico.
* Portas bien limpios.
* Cristalizador.
* Puentes de tinción.* Pipetas Pasteur con chupete.
* Frascos lavadores.
* Tubos de ensayo.
Reactivos
* Colorante en solución según Giemsa de Panreac.
* Solución tampón pH 7,2 de Panreac.
*Metanol.
* Aceite de inmersión.
Muestra
Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. El anticoagulante de elección es la heparina o el EDTA, ya que el citrato sódico y el oxalato potásico puedendar preparaciones defectuosas.
Técnica
* Preparamos un frotis sanguíneo según la técnica descrita con anterioridad.
* Colocamos el frotis sobre el puente de tinción, en el cristalizador yen posición horizontal.
* Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y lo dejamos secar al aire. Con esto procedemos a fijar el frotis.
* Diluimos en un tubo de ensayo 0,2ml de azur-eosina-azul de metileno según Giemsa con 2 ml de solución tampón pH 7,2. Es importante realizar esta dilución en el momento de la tinción, ya que el colorante precipita y no es válido...