Tinci N De Gram

PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA (MONTAJES Y TÉCNICAS DE COLORACIÓN)










TATIANA GALVIS HOLGUÍN
LUZ ELENA DE LA OSSA
JESÚS HERNÁNDEZ GÓMEZ
JHONNY HOYOS GONZALEZ










DOCENTE:
AYDEE MUÑOZ Biol. M.Sc








UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD DE EDUCACIÓN Y CIENCIAS
PROGRAMA DE BIOLOGÍA
2013


INTRODUCCION
El presente trabajo ha sido realizado con el fin de presentarun informe sobre diferentes técnicas de coloración, montajes y preparación de muestras para observación microscópica en el laboratorio de microbiología; el estudio microscópico de las bacterias se facilitan notablemente al tratarlas con colorantes o tintes, permitiendo aumentar el contraste entre las diferentes estructuras y entre ellas y su entorno, haciéndolas claramente visibles ydiferenciables, ya que a simple vista en el microscopio pues no sería posible identificarlas, por tal razón se utilizan diferentes técnicas de tinción. Para las tinciones se utilizan los colorantes, los cuales son compuestos aromáticos solubles en agua (generalmente en forma de sales), que contienen un ion orgánico coloreado y otro ion inorgánico, debido a que la afinidad de los colorantes básicos por lostejidos ácidos y viceversa indica que hay reacciones químicas que conducen a la formación de nuevos compuestos.
Antes de la tinción, las bacterias extraídas del yogur, se encontraban en un medio de cultivo, seguidamente utilizando medidas de asepsia y un portaobjeto estéril, fueron extendidas en una película uniforme y delgada; se conoce a dicha preparación como frotis o extensión fija y se hizoque la película se secara al aire, los microorganismos fueron "fijados" al portaobjetos con la ayuda de calor moderado. Posteriormente se realizaron las diferentes tinciones para lograr identificar las bacterias gram positivas de las gram negativas de acuerdo a su morfología.

OBJETIVOS
Elaborar extendidos o frotis a partir de un cultivo de microorganismos
Adquirir destreza para realizar losmontajes para la observación microscópica de bacterias
Identificar las diferentes técnicas de tinción de microorganismos






MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron dos portaobjetos por cada tinción
Preparación del frotis










Tinción Simple Tinción Diferencial











* Se lava el portaobjetos con agua destilada después del tiempo mencionado.
RESULTADOS

Preparación de los montajesFig. 1 Preparación de los montajes. A) Lavado de las muestras B) secado C) aplicación del colorante cristal violeta

Tinción simple con cristal violeta





Fig. 2: Colonias de bacterias en forma de bacilos (100X)

En esta fotografía se observaron bacterias en forma de bacilos las cuales se encontraban individuales o agrupadas, estas presentaban una coloración violeta debido al colorante empleado(cristal violeta)
Tinción diferencial o tinción de Gram


Fig .4 Tinción de Gram. A) Colonia de bacilos gram positivos (1000X) B) bacilos gram positivos vistos con mayor detalle

DISCUSIÓN
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, lamanera más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes, por medio del cual se pueden visualizar al microscopio la forma, disposición y tipo celular, por ello en el laboratorio se usó el colorante cristal violeta para la tinción simple, que permitió observar e identificar la disposición de las bacterias encontradas en distintas colonias, estas presentaban forma de bacilos y decocos.
Para la identificación y reconocimiento de las bacterias (bacterias gram positivas y gram negativas) presentes en los medios de cultivo se empleó la técnica de tinción de gram denominada así por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Cuando las bacterias fueron fijadas al portaobjetos y se tiñeron con la solución de cristal violeta (colorante básico) y fueron lavadas...