Tincion de gram

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A TDescripción Macroscópica y Microscópica de Bacterias

OBJETIVO GENERAL

Conocer alguna de las tinciones y formas como se describe microscópicamente las bacterias y macroscópicamente sus colonias.

MARCO TEÓRICO

Las tinciones que se usaran durante la practica, son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener, o no, determinadassustancias colorantes, dependiendo de naturaleza del colorante y su interacción con la célula. Aunque los microorganismos puede ser examinados directamente en los microscopios de luz, con frecuencia deben ser fijados y coloreados para aumentar su visibilidad y el detalle de las estructuras.

Un frotis bacteriano es un extendido que se hace a partir de un cultivo de bacterias, en medio solido oliquido, sobre una lamina para poder ser vista en el microscopio. Su elaboración permite que las estructuras internas y externas de la célula sean preservadas y fijadas, evitando de este modo que enzimas y otras reacciones se presenten, afecten la coloración e impidan ver correctamente lo que se está buscando.

Dentro de las tinciones que comúnmente se usan en microbiología encontramos unatinción descubierta en 1883 por Christian Gram, denominada Tinción de Gram. Hace parte de las tinciones conocidas como Tinciones Selectivas que se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, por lo que permite en el caso de la tinción de Gram clasificar las bacterias en dos grupos. Dichadiferenciación es debido a la pared celular existente entre las bacterias Gram positivas (con una capa gruesa de peptidoglicano y dos clases de ácidos teicoicos) y las bacterias Gram negativas (con una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas).

El primer paso de la tinción de Gram debe ser siempre la fijación de la muestra con calor. Tanto las bacteriasG(+) como las G(-) se tiñen con el colorante cristal violeta. Al aplicar el lugol este entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta. Al aplicar el alcohol – acetona, las G(-) sufren el aumento de la porosidad, dejando salir el complejo cristal violeta - lugol, permitiendo asi el paso de cualquier sustancia como lo es el colorante fuscina o safranina, elcual al ser aplicado tiñe el citoplasma bacteriano de un tono rosado. En las G(+) al aplicar el decolorante, se deshidratan las paredes celulares, contrayendo los poros y disminuyendo la permeabilidad, por lo que el complejo lugol – cristal violeta no sale de las células y estas continúan teñidas de color violeta. (Madigan et al 2004).





Existen variados tipos de tinciones y solo porcomentar tenemos las que se clasifican como Tinciones Simples, las que utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. Ejemplo de estas esta la tinción con azul de metileno. En esta tinción, una vez fijada con calor la preparación y luego que seenfríe, se cubre con el colorante azul de metileno durante 1 minuto, se lava con agua y se seca. Posteriormente se observa al microscopio con el objetivo de inmersión (100x) empleando el aceite apropiado. Esta técnica permite observar la morfología y tamaño de las bacterias, así como los tipos de agrupaciones que forman.


Tomado de Madigan et al. (2004). Brock: Biología de losMicroorganismos. 10° edición. Página 64.
Morfologías Bacterianas más Representativas

PROCEDIMIENTO

INSTRUMENTAL BÁSICO SOLUCIONES
• Portaobjetos (Láminas)
• Microscopio.
• Asas Redondas.
• Mechero. • Cristal violeta
• Lugol
• Alcohol-acetona
• Fuscina de Gram.
• Aceite de Inmersión.
• Azul de Metileno.
• Agua.

* Los procedimientos desarrollados en esta práctica se explicaran en el...
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