Tincion De Gram

Objetivos
Objetivo General
Conocer la Técnica de Tinción de Gram
Objetivos Específicos
Identificar los pasos de la Técnica de Tinción de Gram
Reconocer la coloración de las bacterias según su clasificación (Gram Positiva , ó Gram Negativa)
Determinar la importancia de la Técnica de Tinción de Gram en el laboratorio de microbiología.

Introducción
El imperceptible tamaño de las bacteriasy otros microorganismos así como la dificultad para observarlas en detalle con el microscopio óptico por causa de la falta de contraste que existe entre estos, debido a que son usualmente transparente en el medio que les rodea; hizo que se crearan métodos para poder apreciarlas.
La tinción de Gram
Este método de tinción fue descrito por primera vez por el médico danés Christian Gram en 1884utilizado para teñir paredes bacterianas y que permite diferenciar los dos grandes grupos bacterianos: las bacterias gram-positivas y las gram-negativas. La tinción se basa en las diferencias que existen en la composición molecular de las paredes de ambos grupos de bacterias. Con base en la reacción que tengan las paredes de los microorganismos a los colorantes usados con esta técnica, se lescalifica en grampositivos y gramnegativos; considerándose bacterias Gram positivas a las bacterias que se aprecian en color violeta y en color rosa bacterias a las Gram negativas, otra ventaja es que se puede efectuar una percepción primordial a las diferencias entre bacterias, por su morfología (Cocos Bacilos y Espirilos).
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, es debido aque la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, alposeer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglucanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo y manteniendo la coloración azul violácea. En este método de tinción, la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los colorantesde violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego una solución de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; después se lava el portaobjetos con alcohol hasta que éste no arrastre más colorante. Sigue a tal tratamiento una coloración de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida,pardoBismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita
Bacteria Gram Positiva | Bacteria Gram Negativa |
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Tiene una capa gruesa de peptidoglicano (mureina) y dos clases de ácidos teicoicos. Ácido Lipoteicoico que está en la superficie, empotrado en la capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplásmica. Y ácido teicoico de la pared que está en la superficie y se unesólo a la capa de peptidoglicano. El ácido Teicoico es el responsable del determinante antigénico del organismo. Tiene una capa delgada de peptidoglicano (mureina) unida a una membrana exterior por | lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.En el lipopolisacárido, la porción de lípido está embebida en el fosfolípido y el antígeno O polisacárido estáen la superficie. El lípido se llama Lípido A y es tóxico, pero el lipopolisacárido entero se llama Endotoxina. La pared de la célula tiene poros llamado Porines para el transporte de substancias de peso molecular bajo. Entre la membrana citoplásmica y la pared celular hay un espacio periplásmico con enzimas hidrolíticas, enzimas inactivadoras de antibióticos y proteínas de transporte. |...