Tincion de Gram

UNIVERSIDAD LATINA DE AMERICA.


Microbiología.
Practica 5.
“Tinción Gram”


OBJETIVO
Que el alumno aprenda a diferenciar los diferentes tipos de células ya sean Gram positivas o negativasde los medios de cultivo previamente estriados.

FUNDAMENTO
La tinción de gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el daignostico microbiológico, fue descubierta por Hans ChristianGram en 1884.
La mayor parte de las muestras sometidas a examen cuando se sospecha infección bacteriana deben ser extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas y examinadas en elmicroscopio.
Los reactivos empleados en la tinción de Gram son elcristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcoholcetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste).
El cristal violetasirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura ycomposición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan de color púrpura ovioleta al microscopio.
Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo queaumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estasbacterias se observan de color rojo al microscopio
MATERIAL
•Mechero de Bunsen
•Asa bacteriológica
•Portaobjetos
•Varillas (soporte)

EQUIPO
Microscopio Óptico





REACTIVOS QUIMICOS.•Cristal violeta
•Solución de lugol
•Alcohol acetona
•Safranina
•Aceite de inmersión

MATERIAL BIOLOGICO
Medio de cultivo preparado previamente.





PROCEDIMIENTO
OBSERVACIONES
De la...