Tinciones celulares




Tinciones celulares


Las células no se pueden ver a simple vista por su diminuto tamaño. Lo que se hace para hacer visible la célula al ojo humano es teñirla con la ayuda de diferentes colorantes como el azul de metileno, tinta china y luego observar dichas tinciones al microscopio óptico. El resultado de la tinción en la muestra celular no siempre tendrá el mismo aspecto, esodependerá si el procedimiento estuvo bien realizado, el colorante y el tipo de células a teñir.







Introducción

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es muy pequeño y resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el método más simple de aumentar el contraste es la utilización decolorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. La coloración permite contrastar entre sí diferentes estructuras.
La obtención de cortes delgados soluciona uno de los inconvenientes de laobservación microscópica, pero hace evidente otro de ellos: Posibilita que los cortes sean transparentes, aún cuando la falta de colores y contrastes en las estructuras celulares no permite visualizar casi ningún componente. Mediante la coloración de tejidos se obtienen resultados muy superiores.

La tinción o coloración se efectúa con dos propósitos. En un caso se posibilita el estudio morfológico oestructural, sin obtener mayor información sobre la naturaleza química de las estructuras observadas. En el otro se utilizan métodos que tienden a identificar un determinado tipo de molécula o sustancia, visualizándola microscópicamente.

La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por los materiales celulares:
a. Catiónicos. Son sustancias quetienen carga positiva y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Penetran en el interior de las células y las tiñen. Ejemplos: Azul de metileno, Cristal violeta, Safranina.
b. Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las células, sino el entorno. Eneste caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: Eosina, Nigrosina.
c. Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: Negro sudán.
Por otro lado las tinciones pueden realizarse siguiendo distintos métodos.




Método experimental

1.- Tinción simple con azul de metileno (Tinción positiva).
Procedimiento:
Extensión: Utilizando el asa de siembra tomar una muestrade colonias (stafilococus aureus) y extenderla sobre un portaobjetos.
Fijación: Pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero hasta que se seque, sin permitir que llegue a quemarse.
Añadir Azul de metileno y esperar dos minutos.
Lavar con agua.
Secar al aire.
Observar primero con el objetivo x40; luego se añade aceite de inmersión y se observa con el objetivox100.


Objetivo: Realizar tinción simple positiva con azul de metileno.
Material: Mucosa bucal
Método: tinción simple
Aumento: (inmersión) 100X
Observaciones: Sólo el interior (citoplasma) de la célula se tiñe de color azul, específicamente el núcleo.






2.- Tinción simple con Nigrosina (Tinción negativa).
Procedimiento:

Extender la muestra (lacto basilo) con el asa de siembra.Fijación.
Colocar una gota de Tinta China sobre uno de los extremos del portaobjetos.
Realizar un frotis: con un segundo portaobjetos se extiende la muestra de modo que cubra toda la superficie del primero.
Secar al aire.
Observar (primero 40x y luego 100x con aceite de inmersión).


Objetivo: Realizar tinción simple negativo (tinta china).
Material: Lacto bacilo
Método: Tinción...