Tinción de Gram, tinción con lactofenol y análisis de microorganismos presentes en muestras de aire y agua


Tinción de Gram, tinción con lactofenol y análisis de microorganismos presentes en muestras de aire y agua

Resumen: La tinción de Gram y la tinción en fresco son dos de las técnicas más usados para hacer identificación de bacterias y hongos, respectivamente. Prácticamente son imprescindibles al momento de caracterizar una población microbiana, por lo cual hace falta saber realizar losanálisis y hacerlos correctamente. Objetivos: Dominar las técnicas de coloración para microorganismos y realizar un análisis microbiano de muestras de aire y agua. Procedimiento: Se hizo una tinción de algunos microorganismos conocidos, de manera que se asegurara una técnica correcta. Después de eso y con la técnica estandarizada y asegurada, se procedió a hacer un análisis de muestras de aire y agua.Resultados: Se caracterizaron las poblaciones de microorganismos conocidos y se analizaron las poblaciones de microorganismos en agua y aire.

Introducción
La tinción de Gram y la tinción en fresco son las más importantes técnicas de caracterización a poblaciones microbianas. Son técnicas sencillas y económicas, que permiten una identificación confiable de los microorganismos y su potencial usoo amenaza, dependiendo del área que se esté trabajando. Es de vital importancia para cualquier persona con interés en poblaciones microbiológicas, dominar estas técnicas de tinción y las técnicas de microscopia necesarias para hacer el análisis que requiera en su campo. Las que se abordaron en este trabajo fueron:
1. Tinción de Gram
El primer tipo de tinción es la Tinción de Gram. Es una tincióndiferencial, lo que significa que no tiñe del mismo modo todas las células, y permite clasificar las células en dos grandes grupos: Gram Positivas y Gram Negativas (Madigan et al, 2003).
La diferencia entre las bacterias Gram Positivas y Gram negativas, es su constitución en la membrana celular. Las Gram Positivas poseen una gruesa capa de un compuesto llamado peptidoglicano, seguido de unabicapa lipídica que da acceso al citoplasma. Las bacterias Gram Negativas por otro lado, poseen una membrana de bicapa lipídica seguida de una capa delgada de peptidoglicano y otra bicapa lipídica en frontera con el citoplasma. (Figura 1)

Figura 1. Diferencias entre Gram + y Gram – (Tomada de monografías.com)
La tinción de Gram se basa en esta estructura de la membrana, que a partir de loscompuestos cristal violeta, lugol, alcohol acetona y fuscina de Gram genera una coloración de membrana, fijación del colorante, disolución del colorante presente en la bicapa lipídica y coloración diferencial, respectivamente.
La explicación es sencilla: El cristal violeta penetra en las pareden de ambos tipos de célula, y el lugol penetra la célula y fija con más fuerza el cristal a la membrana y sehace insoluble en agua. Cuando se añade el alcohol acetona, se disuelve la bicapa lipídica coloreada de las células Gram Negativas, mientras que la pared de peptidoglicano de las células Gram Positivas mantiene su color a pesar de disolver también su parte apolar.
Una vez se agrega alcohol acetona, las bacterias Gram Negativas pierden su color y las Gram Positivas lo conservan. Para cuando seagrega la fucsina de Gram, las bacterias Gram Negativas toman el color rosado del compuesto mientras las Gram Positivas conservan el color azul-morado original del cristal violeta y con esto, se puede proceder a hacer la revisión al microscopio, identificando las Gram Negativas con color rosado y las Gram Positivas con color morado.
2. Coloración con Lactofenol
El lactofenol es un compuesto orgánicoconformado por ácido láctico, fenol, glicerol y agua. Se utiliza para realizar preparaciones en fresco de hongos microscópicos y su función es destruir la flora que acompaña al hongo, así como cubrirlo con una película que impide el daño y conserva el tejido, permitiendo que se vea bien al microscopio.
Desde luego, para no gastar sustancias haciendo tinciones en organismos no válidos, se...